目的:1.建立液液萃取,離子色譜電導檢測法檢測生物樣品中硫氰酸根的方法;2.建立液液萃取,LC-MS/MS法檢測生物樣品中2-氨基噻唑啉-4-羧酸(ATCA)的方法;3.制定健康人群體內硫氰酸根(SCN~-)及2-氨基噻唑啉-4-羧酸(ATCA)含量的參考值范圍。方法:1.受試者志愿者124名(男性45人,女性79人),年齡18-27周歲。所有參與者無吸煙嗜好,無心、肝、肺、腎臟疾病史等其他慢性病,并簽署知情同意書。2.標本采集志愿者早晨空腹狀態(tài)下,從肘靜脈采血20m L,分裝于血清、血漿、全血等不同采血管中。血清、血漿組凝血后,5000r/min離心5min,取上清后分裝在凍存管中,放入-80℃冰箱保存以待檢測。中毒案例樣品6例,檢材為全血,來源于山西醫(yī)科大學司法鑒定中心和北京市公安局。3.提取檢測待檢生物樣品經液液萃取,離子色譜電導檢測器檢測硫氰酸根(SCN~-),利用保留時間以及樣品添加實驗進行定性,通過標準曲線(外標法)定量志愿者體內硫氰酸根含量。待檢生物樣品添加內標(ATCA-13C,15N2),經液液萃取,LC-MS/MS檢測,MRM模式掃描,利用保留時間、定量離子與定性離子對比例定性,標準曲線(內標法)定量志愿者體內2-氨基噻唑啉-4-羧酸(ATCA)含量。4.數據處理數據用SPSS 20.0進行秩和檢驗。P0.05時,認為有統(tǒng)計學差異。結果:1.樣品中硫氰酸根在125ng/m L到5000ng/m L之間線性范圍良好,相關系數R2為0.9999,最低檢出限20.0ng/mL,最低定量下限40.7ng/m L,日間和日內精密度均小于10%。45例健康男性血清中硫氰酸根含量374.8±209.6ng/m L,范圍64.1ng/m L-943.4ng/mL;75例健康女性血清中硫氰酸根含量395.8±145.9ng/mL,范圍109.7ng/mL-807.5ng/mL,性別間無統(tǒng)計學差異。45例健康男性血漿中硫氰酸根含量261.6±146.7ng/mL,范圍53.5ng/mL-681.6ng/m L;78例健康女性血漿中硫氰酸根含量273.7±114.9ng/m L,范圍62.4ng/mL-557.3ng/mL,性別間無統(tǒng)計學差異。43例健康男性全血中硫氰酸根含量208.0±131.4ng/m L,范圍40.7ng/mL-548.9ng/mL;79例健康女性全血中硫氰酸根含量222.7±105.3ng/m L,范圍72.5ng/mL-539.8ng/mL,性別間無統(tǒng)計學差異。2.樣品中2-氨基噻唑啉-4-羧酸(ATCA)在12.5ng/m L到1000.0ng/m L之間線性范圍良好,相關系數R2為0.9999,最低檢出限1.0ng/m L,最低定量下限5.0ng/mL,日間和日內精密度均小于10%。44例健康男性血清中2-氨基噻唑啉-4-羧酸(ATCA)含量238.4±82.5ng/m L,范圍101.6ng/mL-385.1ng/m L;76例健康女性血清中2-氨基噻唑啉-4-羧酸(ATCA)含量215.3±86.4ng/mL,范圍86.8ng/mL-381.0ng/mL,性別間無統(tǒng)計學差異。45例健康男性血漿中2-氨基噻唑啉-4-羧酸(ATCA)含量236.1±85.4ng/m L,范圍81.4ng/m L-440.0ng/m L;79例健康女性血漿中2-氨基噻唑啉-4-羧酸(ATCA)含量200.1±96.3ng/mL,范圍81.6ng/mL-387.7ng/mL,性別間無統(tǒng)計學差異。44例健康男性全血中2-氨基噻唑啉-4-羧酸(ATCA)含量73.7±35.4ng/m L,范圍22.6ng/mL-163.1ng/m L;79例健康女性全血中2-氨基噻唑啉-4-羧酸(ATCA)含量77.1±38.2ng/mL,范圍25.5ng/mL-177.0ng/mL,性別間無統(tǒng)計學差異。3.6例中毒案件硫氰酸根含量4872.0±4198.0ng/mL,范圍1166.0ng/mL-11966.0ng/m L。2-氨基噻唑啉-4-羧酸(ATCA)含量1026.0±1169.0ng/m L,范圍318.0ng/m L-3396.0ng/m L。結論:1.離子色譜電導檢測法可用于檢測血清、血漿、全血中硫氰酸根含量。該方法操作簡便,回收率高、專屬性強、靈敏度高、準確度高,可滿足正常人群及中毒人群體內硫氰酸根的定性、定量檢測。統(tǒng)計學比較顯示,血清中硫氰酸根中含量大于血漿中硫氰酸根含量,血漿中硫氰酸根含量大于全血中的硫氰酸根含量。健康人群血清中硫氰酸根參考值范圍64.1ng/m L-943.4ng/m L,95%參考值上限775.2ng/mL;血漿中硫氰酸根參考值范圍53.5ng/m L-681.6ng/m L,95%參考值上限513.1ng/m L;全血中硫氰酸根參考值范圍40.7-548.9ng/m L,95%參考值上限457.9ng/mL。2.LC-MS/MS法可用于檢測生物樣品中2-氨基噻唑啉-4-羧酸(ATCA),利用保留時間及定量離子與定性離子對比例定性,利用內標物與目標物峰面積比值,內標法和工作曲線法定量。方法回收率高、專屬性強、特異性高、內源性物質對目標物檢測干擾小,方法靈敏度高、準確度高,可滿足正常人群及中毒人群體內2-氨基噻唑啉-4-羧酸(ATCA)的定性、定量要求。統(tǒng)計學比較顯示,血清和血漿中2-氨基噻唑啉-4-羧酸(ATCA)含量沒有統(tǒng)計學差異,但均明顯高于全血中2-氨基噻唑啉-4-羧酸含量。血清中2-氨基噻唑啉-4-羧酸(ATCA)的參考范圍86.8ng/mL-385.1ng/mL,95%的參考值上限366.3ng/mL,血漿中2-氨基噻唑啉-4-羧酸(ATCA)的參考范圍81.4ng/m L-440.0ng/m L,95%的參考值上限375.7ng/m L;全血中2-氨基噻唑啉-4-羧酸(ATCA)的參考范圍22.6ng/m L-177.0ng/m L,95%的參考值上限154.5ng/m L。3.本次研究建立了血清、血漿、全血中氰化物兩種代謝物的檢測方法,均滿足正常人群及中毒人群體內含量檢測。針對正常人群分別制定了各自對應的參考值范圍,為法醫(yī)學鑒定中氰化物中毒案件提供一定的參考。
【學位單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：D919
【文章目錄】：
摘要
Abstract
常用縮寫詞中英文對照表
前言
第一部分 生物樣品中硫氰酸根（SCN-）的離子色譜電導檢測方法
    1 材料與方法
        1.1 儀器
        1.2 試劑
        1.3 標準溶液的配制
        1.4 儀器方法
        1.5 樣品的制備
    2 結果
        2.1 離子色譜圖
        2.2 線性范圍與最低檢出限
        2.3 精密度與準確度
    3 討論
    4 結論
第二部分 生物樣品中2-氨基噻唑啉-4-羧酸（ATCA）LC-MS/MS檢測方法
    1 材料與方法
        1.1 儀器
        1.2 試劑
        1.3 標準品溶液配制
        1.4 色譜條件
        1.5 質譜條件
        1.6 樣品制備和提取
    2 結果
        2.1 標準品色譜圖及質譜圖
        2.2 樣品色譜圖及質譜圖
        2.3 工作曲線
        2.4 精密度與準確度
    3 討論
    4 結論
第三部分 健康人群中硫氰酸根（SCN-）與2-氨基噻唑啉-4-羧酸（ATCA）的檢測
    1 材料與方法
        1.1 儀器
        1.2 試劑
        1.3 標準溶液的配制
        1.4 儀器的方法
        1.5 樣品的采集
        1.6 樣品的前處理
    2 結果
        2.1 樣品中的硫氰酸根的離子色譜圖
        2.2 志愿者體內硫氰酸根的含量的檢測
        2.3 樣品中2-氨基噻唑啉-4-羧酸（ATCA）的MRM色譜圖及質譜圖
        2.4 志愿者體內2-氨基噻唑啉-4-羧酸（ATCA）的含量的檢測
    3 討論
    4 結論
第四部分 中毒人群中硫氰酸根（SCN-）與2-氨基噻唑啉-4-羧酸（ATCA）的檢測
    1 材料與方法
        1.1 儀器
        1.2 試劑
        1.3 標準溶液的而配制
        1.4 儀器的方法
        1.5 樣品的采集
        1.6 樣品的前處理
    2 結果
        2.1 樣品中的硫氰酸根的離子色譜圖
        2.2 樣品中2-氨基噻唑啉-4-羧酸（ATCA）的MRM色譜圖及質譜圖
        2.3 案件中的硫氰酸根及2-氨基噻唑啉-4-羧酸的檢測結果
    3 討論
    4 結論
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝
個人簡歷

【參考文獻】

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本文編號：2872340