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抵抗素通過AMPK/FOXO3a通路介導自噬誘導H9c2心肌細胞肥大

發(fā)布時間:2024-07-08 22:29
  目的:探究抵抗素導致H9c2心肌細胞肥大是通過調(diào)控AMPK/FOXO3a信號通路和自噬活動及其可能的分子機制。方法:培養(yǎng)H9c2心肌細胞,待生長活力良好時,用含胎牛血清濃度為0.1%的培養(yǎng)基對細胞進行饑餓24h。根據(jù)實驗目的分為兩大部分:第一部分將細胞分為4組,分別是Con組:對照組;Res組:抵抗素50 ng/mL組;(Res+Met)組:抵抗素50 ng/m L加二甲雙胍2 mmol/L組;Met組:二甲雙胍2 mmol/L組。第二部分同樣將H9c2心肌細胞分為4組,依次是Con組:對照組;Res組:抵抗素50 ng/mL組;(Res+Rap)組:抵抗素50 ng/mL加雷帕霉素100nmol/L組;Rap組:雷帕霉素100nmol/L組。用Image J分析細胞表面積;BCA法測定單細胞蛋白含量;實時熒光PCR(RT-qPCR)檢測心肌肥大相關(guān)胚胎基因BNF、β-MHC的表達量;Western Blot檢測p-FOXO3a、p-AMPK、p-m TOR、FOXO3a、AMPK、mTOR等通路蛋白表達及自噬相關(guān)蛋白Beclin1、LC3表達量。結(jié)果:(1)抵抗素能明顯增大H9c2心...

【文章頁數(shù)】:60 頁

【學位級別】:碩士

【部分圖文】:

圖1.抵抗素導致H9c2心肌細胞肥大的可能機制

圖1.抵抗素導致H9c2心肌細胞肥大的可能機制

3圖1.抵抗素導致H9c2心肌細胞肥大的可能機制。抵抗素可與細胞膜上的TLR4/MD2受體結(jié)合,通過細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導激動LKB1/AMPK/TSC2/Rheb信號分子,抑制mTORC1進一步促進了自噬從而導致心肌細胞肥大,此外mTORC1


圖1各組藥物干預后的H9c2心肌細胞形態(tài)

圖1各組藥物干預后的H9c2心肌細胞形態(tài)

2.1.1抵抗素對心肌細胞面積變化的調(diào)節(jié)作用抵抗素誘導心肌細胞表面積增大,但可以分別被二甲雙胍改善。細胞相應處理36h后,觀察細胞貼壁生長,呈長梭形,胞質(zhì)豐富,細胞大小可見差異。Con組:(4147±141.7),Res組:(7554±265.2),Res+Met組(....


圖2不同藥物處理心肌細胞36h后,使用ImageJ軟件分析細胞表面積的變化

圖2不同藥物處理心肌細胞36h后,使用ImageJ軟件分析細胞表面積的變化

圖2不同藥物處理心肌細胞36h后,使用ImageJ軟件分析細胞表面積的變化細胞表面積。**表示P<0.01。2.1.2抵抗素對心肌細胞單細胞蛋白含量的調(diào)節(jié)作用抵抗素誘導心肌細胞蛋白含量增多,但可以分別被二甲雙胍、雷胞相應處理36h后,觀察細胞貼壁生長,....


圖2藥物處理后,各實驗組單細胞蛋白含量

圖2藥物處理后,各實驗組單細胞蛋白含量

圖2藥物處理后,各實驗組單細胞蛋白含量。抵抗素可以增加單細胞內(nèi)的0.05。2.1.3抵抗素對心肌細胞胚胎基因的調(diào)節(jié)作用細胞對應處理36h后,提取RNA反轉(zhuǎn)錄后實時熒光定量PCR分β-MHC的相對表達量。BNF結(jié)果:Con組:1.0,Res組:(10.2±組(2.....



本文編號:4003970

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