目的:探究抵抗素導(dǎo)致H9c2心肌細(xì)胞肥大是通過調(diào)控AMPK/FOXO3a信號(hào)通路和自噬活動(dòng)及其可能的分子機(jī)制。方法:培養(yǎng)H9c2心肌細(xì)胞,待生長(zhǎng)活力良好時(shí),用含胎牛血清濃度為0.1%的培養(yǎng)基對(duì)細(xì)胞進(jìn)行饑餓24h。根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康姆譃閮纱蟛糠?第一部分將細(xì)胞分為4組,分別是Con組:對(duì)照組;Res組:抵抗素50 ng/mL組;(Res+Met)組:抵抗素50 ng/m L加二甲雙胍2 mmol/L組;Met組:二甲雙胍2 mmol/L組。第二部分同樣將H9c2心肌細(xì)胞分為4組,依次是Con組:對(duì)照組;Res組:抵抗素50 ng/mL組;(Res+Rap)組:抵抗素50 ng/mL加雷帕霉素100nmol/L組;Rap組:雷帕霉素100nmol/L組。用Image J分析細(xì)胞表面積;BCA法測(cè)定單細(xì)胞蛋白含量;實(shí)時(shí)熒光PCR(RT-qPCR)檢測(cè)心肌肥大相關(guān)胚胎基因BNF、β-MHC的表達(dá)量;Western Blot檢測(cè)p-FOXO3a、p-AMPK、p-m TOR、FOXO3a、AMPK、mTOR等通路蛋白表達(dá)及自噬相關(guān)蛋白Beclin1、LC3表達(dá)量。結(jié)果:(1)抵抗素能明顯增大H9c2心...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.抵抗素導(dǎo)致H9c2心肌細(xì)胞肥大的可能機(jī)制

3圖1.抵抗素導(dǎo)致H9c2心肌細(xì)胞肥大的可能機(jī)制。抵抗素可與細(xì)胞膜上的TLR4/MD2受體結(jié)合，通過細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)激動(dòng)LKB1/AMPK/TSC2/Rheb信號(hào)分子，抑制mTORC1進(jìn)一步促進(jìn)了自噬從而導(dǎo)致心肌細(xì)胞肥大，此外mTORC1

圖1各組藥物干預(yù)后的H9c2心肌細(xì)胞形態(tài)

2.1.1抵抗素對(duì)心肌細(xì)胞面積變化的調(diào)節(jié)作用抵抗素誘導(dǎo)心肌細(xì)胞表面積增大，但可以分別被二甲雙胍改善。細(xì)胞相應(yīng)處理36h后，觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，呈長(zhǎng)梭形，胞質(zhì)豐富，細(xì)胞大小可見差異。Con組：（4147±141.7），Res組：（7554±265.2），Res+Met組（....

圖2不同藥物處理心肌細(xì)胞36h后，使用ImageJ軟件分析細(xì)胞表面積的變化

圖2不同藥物處理心肌細(xì)胞36h后，使用ImageJ軟件分析細(xì)胞表面積的變化細(xì)胞表面積。**表示P<0.01。2.1.2抵抗素對(duì)心肌細(xì)胞單細(xì)胞蛋白含量的調(diào)節(jié)作用抵抗素誘導(dǎo)心肌細(xì)胞蛋白含量增多，但可以分別被二甲雙胍、雷胞相應(yīng)處理36h后，觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，....

圖2藥物處理后，各實(shí)驗(yàn)組單細(xì)胞蛋白含量

圖2藥物處理后，各實(shí)驗(yàn)組單細(xì)胞蛋白含量。抵抗素可以增加單細(xì)胞內(nèi)的0.05。2.1.3抵抗素對(duì)心肌細(xì)胞胚胎基因的調(diào)節(jié)作用細(xì)胞對(duì)應(yīng)處理36h后，提取RNA反轉(zhuǎn)錄后實(shí)時(shí)熒光定量PCR分β-MHC的相對(duì)表達(dá)量。BNF結(jié)果：Con組：1.0，Res組：（10.2±組（2.....

本文編號(hào)：4003970