發(fā)布時間：2016-11-03 15:11

  本文關(guān)鍵詞：自噬在ox-LDL誘導的炎癥反應中的作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《山東大學》 2014年

自噬在ox-LDL誘導的炎癥反應中的作用研究

郝鳳成  

【摘要】：心腦血管疾病是目前人類死亡的主要原因之一,動脈粥樣硬化是心腦血管疾病的病理基礎。動脈粥樣硬化由許多因素引起,其發(fā)病機制到目前仍未完全明確,許多研究表明脂代謝異常和血管的炎癥反應均參與了動脈粥樣硬化的形成和發(fā)展。血液中的低密度脂蛋白(low density lipoprotein, LDL)在動脈粥樣硬化的發(fā)生中占有重要位置,LDL可以引起血管內(nèi)皮細胞功能障礙和內(nèi)皮細胞損傷,內(nèi)皮細胞損傷之后可以促進內(nèi)皮細胞表面的ICAM1和VCAM1的表達,使得血液中的單核細胞和內(nèi)皮細胞粘附并向內(nèi)皮下遷移,單核細胞進入動脈內(nèi)膜后,吞噬LDL,并使其氧化轉(zhuǎn)變?yōu)閛x-LDL,同時單核細胞轉(zhuǎn)變?yōu)榫奘杉毎�。巨噬細胞能夠分泌多種細胞因子,促進血管的局部炎癥反應,加重血管內(nèi)皮損傷并最終導致動脈粥樣硬化的發(fā)生和進展。 隨著人們對自噬在許多疾病發(fā)展過程中的研究,動脈粥樣硬化斑塊中的自噬現(xiàn)象也引起了人們的關(guān)注。近年的研究顯示,動脈粥樣硬化斑塊內(nèi)的細胞具有一定程度的自噬現(xiàn)象,自噬也是決定其進程的重要影響因素。自噬是真核細胞用來降解和再循環(huán)其胞漿內(nèi)容物的一種方式,基礎水平的自噬在血管功能及形態(tài)的維持中發(fā)揮重要作用。在本研究中,我們觀察ox-LDL能否誘導人臍靜脈內(nèi)皮細胞HUVEC和單核細胞THP1產(chǎn)生自噬,并初步探討了自噬在ox-LDL誘導的血管局部炎癥反應中的作用。第一章自噬在ox-LDL誘導的血管內(nèi)皮細胞炎癥反應中的作用研究目的： 觀察ox-LDL(?)能否誘導HUVEC細胞產(chǎn)生自噬,同時用3-MA抑制自噬,探討自噬對ox-LDL誘導的HUVEC細胞中ICAM1、VCAM1和MCP-1表達的影響。 方法： 1. Western-Blot檢測20、40、80μg/ml的ox-LDL作用于HUVEC細胞后LC3的表達變化,免疫熒光檢測LC3蛋白在細胞內(nèi)的分布,從而確定ox-LDL能否誘導HUVEC細胞產(chǎn)生自噬。 2.MDC染色檢測20、40、80μg/ml的0x-LDL作用于HUVEC細胞后細胞內(nèi)的酸性囊泡,通過流式細胞儀檢測細胞內(nèi)MDC的熒光強度,熒光顯微鏡觀察細胞內(nèi)的酸性囊泡,進一步明確ox-LDL能否誘導HUVEC細胞產(chǎn)生自噬。 3.為了確定自噬對ox-LDL誘導的炎癥反應的影響,將實驗分為4組：(1)對照組,培養(yǎng)液培養(yǎng),作為對照；(2)ox-LDL刺激組(80μg/ml);(3)3-MA組(5mmol/L),(4)3-MA(5mmol/L)+ox-LDL (80μg/ml)。Western-Blot檢測ox-LDL和3-MA作用后的LC3、ICAM1和VCAM1的表達變化,ELISA檢測MCP-1的表達變化。 結(jié)果： 1. ox-LDL作用于HUVEC細胞后,可以使LC3的表達明顯增高,并且LCI被剪切成LC3Ⅱ的數(shù)量明顯增多,免疫熒光顯示LC3在細胞內(nèi)的聚集明顯增多,細胞內(nèi)出現(xiàn)典型的點狀熒光,這說明ox-LDL引起了細胞內(nèi)自噬泡的形成。 2.流式結(jié)果顯示,ox-LDL作用于HUVEC細胞后,細胞內(nèi)MDC的熒光明顯增強。同時在熒光顯微鏡下觀察顯示,ox-LDL作用于HUVEC細胞后,細胞中被MDC染色的酸性囊泡明顯增多,這些結(jié)果進一步表明ox-LDL可以誘導HUVEC細胞產(chǎn)生自噬。 3. Western-blot結(jié)果顯示,ox-LDL可以使HUVEC細胞中的ICAM1和VCAM1的表達增高,當3-MA抑制自噬后,ox-LDL誘導的ICAM1和VCAM1的表達會進一步升高；ELISA結(jié)果顯示ox-LDL可以使HUVEC細胞中的MCP-1的表達增高,抑制自噬后,ox-LDL誘導的MCP-1的表達會進一步升高。 結(jié)論： ox-LDL可以誘導臍靜脈內(nèi)皮細胞HUVEC產(chǎn)生自噬,抑制自噬后,可以使ox-LDL誘導的炎癥反應進一步增強,說明自噬對ox-LDL誘導的炎癥反應起到一定的保護作用。 第二章自噬在ox-LDL誘導的單核細胞炎癥反應中的作用研究 目的：觀察ox-LDL能否誘導單核細胞THP1細胞產(chǎn)生自噬,同時用3-MA抑制自噬,探討自噬對ox-LDL誘導的THP1細胞中TNF-α、IL-1和IL-6表達的影響。 方法： 1.Westem-Blot檢測20、40、80μg/ml的ox-LDL作用于THP1細胞后LC3的表達變化,免疫熒光檢測LC3蛋白在細胞內(nèi)的分布,確定ox-LDL能否誘導THP1細胞產(chǎn)生自噬。 2.MDC染色檢測20、40、80μg/ml的ox-LDL作用于THP1細胞后細胞內(nèi)的酸性囊泡,通過流式細胞儀檢測細胞內(nèi)MDC的熒光強度,熒光顯微鏡觀察細胞內(nèi)的酸性囊泡,進一步明確ox-LDL能否誘導THP1細胞產(chǎn)生自噬。 3.為了確定自噬對ox-LDL誘導的炎癥反應的影響,將實驗分為4組：(1)對照組,培養(yǎng)液培養(yǎng),作為對照；(2)ox-LDL刺激組(80μg/ml)；(3)3-MA組(5mmol/L), (4)3-MA(5mmol/L)+ox-LDL(80μg/ml)。Western-Blot檢測ox-LDL和3-MA作用后的LC3的表達變化,ELISA檢測]TNF-α、IL-1和IL-6表達的變化。 結(jié)果： 1.ox-LDL作用于THP1細胞后,可以使LC3的表達明顯增高,并且LCI被剪切成LC3Ⅱ的數(shù)量明顯增多,免疫熒光顯示LC3在細胞內(nèi)的聚集明顯增多,細胞內(nèi)出現(xiàn)典型的點狀熒光,這就說明ox-LDL引起了細胞內(nèi)自噬泡的形成。 2.流式結(jié)果顯示,ox-LDL作用于THP1細胞后,細胞內(nèi)MDC的熒光明顯增強。同時在熒光顯微鏡下觀察顯示,ox-LDL作用于THP1細胞后,細胞中被MDC染色的酸性囊泡明顯增多,這些結(jié)果進一步表明ox-LDL可以誘導THP1細胞產(chǎn)生自噬。 3.Western結(jié)果顯示,加入3-MA后,可以使ox-LDL誘導的LCⅡ的表達下降,說明3-MA可以抑制ox-LDL誘導的自噬；ELISA結(jié)果顯示ox-LDL可以使THP1細胞中的TNF-α、IL-1和IL-6的表達增高,抑制自噬后,ox-LDL誘導的TNF-α、IL-1和IL-6的表達會進一步升高。 結(jié)論： ox-LDL可以誘導單核細胞THP1產(chǎn)生自噬,抑制自噬后,可以使ox-LDL誘導的炎癥反應進一步增強,說明自噬對ox-LDL誘導的炎癥反應起到一定的保護作用。

【關(guān)鍵詞】：
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R543.5
【目錄】：

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2 陳松峰;邵增務;;自噬相關(guān)信號轉(zhuǎn)導通路研究進展[J];國際骨科學雜志;2013年04期

3 丁劍波;張佳瑩;李秀惠;;細胞自噬在急性肝損傷中的變化及作用[J];中國肝臟病雜志(電子版);2013年03期

4 劉斌;唐靜;袁敏;李世英;;血管性癡呆大鼠海馬CA1區(qū)自噬及微管相關(guān)蛋白1輕鏈3的表達[J];第二軍醫(yī)大學學報;2013年09期

5 唐楊烽;韓林;徐激斌;宋智鋼;陸方林;鄒良建;徐志云;;A型主動脈夾層組織Beclin1及微管相關(guān)蛋白1輕鏈3的表達及意義[J];第二軍醫(yī)大學學報;2013年09期

6 秦利燕;王濱;倪振洪;連繼勤;宋方洲;袁成福;劉革力;;索拉非尼誘導肝癌HepG2細胞自噬的機制及意義[J];第三軍醫(yī)大學學報;2013年22期

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9 秦興發(fā);張華;漆洪波;陳國慶;馬海霞;;缺氧誘導滋養(yǎng)細胞自噬參與子癇前期發(fā)病的實驗研究[J];重慶醫(yī)學;2014年05期

10 劉志祥;謝飛;吳玉竹;李文兵;;血清降鈣素原、超敏C反應蛋白與冠狀動脈粥樣硬化病變程度的關(guān)系[J];國際檢驗醫(yī)學雜志;2014年04期

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7 黃鶯;老齡小鼠急性心肌梗塞后Wnt及NF-κB信號通路的表達及相互作用與心室重構(gòu)的關(guān)系研究[D];新疆醫(yī)科大學;2009年

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8 鐘春林;陳麗;;自噬在心臟疾病中的研究[J];國際心血管病雜志;2009年05期

9 楊光明;高鵬;鄭杰;;自噬——程序性細胞死亡的執(zhí)行者與管理者[J];醫(yī)學綜述;2010年14期

10 李冬娜;梁幼生;周永華;張煥相;沈海英;駱偉;龔唯;諸葛洪祥;;剛地弓形蟲速殖子與鼠星形膠質(zhì)細胞體外共培養(yǎng)的實驗觀察[J];中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志;2010年04期

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1 韋雪;漆永梅;張迎梅;;鎘、活性氧自由基與自噬發(fā)生的分子機制[A];中國活性氧生物學效應學術(shù)會議論文集（第一冊）[C];2011年

2 李康生;代劍平;;病毒感染與細胞自噬[A];新發(fā)和再發(fā)傳染病防治熱點研討會論文集[C];2011年

3 王平;;骨骼肌自噬及運動對其影響機制研究進展[A];2011年中國生理學會運動生理學專業(yè)委員會會議暨“運動與骨骼肌”學術(shù)研討會論文集[C];2011年

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5 陳永;鄒珅珅;謝志平;梁永恒;;釀酒酵母中的小G蛋白Ypt51對細胞自噬的影響[A];“細胞活動 生命活力”——中國細胞生物學學會全體會員代表大會暨第十二次學術(shù)大會論文摘要集[C];2011年

6 ;自噬改變在錳誘導的PC12細胞毒性中的作用[A];中國毒理學會第三屆中青年學者科技論壇暨2011年全國前列腺藥理毒理學研討會論文集[C];2011年

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8 鄒珅珅;陳永;劉玉濤;謝志平;梁永恒;;釀酒酵母中的Trs130參與細胞自噬的研究[A];“細胞活動 生命活力”——中國細胞生物學學會全體會員代表大會暨第十二次學術(shù)大會論文摘要集[C];2011年

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1 張明永;[N];廣東科技報;2011年

2 記者白毅;[N];中國醫(yī)藥報;2009年

3 記者 胡德榮;[N];健康報;2008年

4 記者 白毅;[N];中國醫(yī)藥報;2010年

5 記者 任海軍;[N];新華每日電訊;2009年

6 任海軍;[N];大眾衛(wèi)生報;2009年

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1 謝瑩;晚期糖基化終產(chǎn)物誘導內(nèi)皮細胞中的自噬[D];蘇州大學;2011年

2 易聰;乙�；�在自噬過程中的功能和分子機制的研究[D];清華大學;2012年

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4 張俊;自噬在肺缺血再灌注損傷中的作用及其機制研究[D];華中科技大學;2013年

5 鄭芳;兩種小分子化合物調(diào)節(jié)自噬及其相關(guān)生物學功能的研究[D];中國科學技術(shù)大學;2012年

6 張艷林;自噬在氧化低密度脂蛋白誘導內(nèi)皮細胞損傷中的作用及其機制探討[D];蘇州大學;2010年

7 吳雅春;自噬在結(jié)腸癌及胃癌細胞體外藥物干預過程中的作用研究[D];浙江大學;2010年

8 蔡增林;Dynein在α-synuclein自噬性清除中的作用[D];蘇州大學;2010年

9 肖榮;自噬在嚴重燒傷早期心肌損害中的作用及其機制研究[D];第三軍醫(yī)大學;2012年

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1 涂芊茜;自噬在脂肪酸誘導肝損傷中的作用及機制的初步研究[D];第二軍醫(yī)大學;2011年

2 陳哲;自噬在人骨髓間充質(zhì)干細胞放射損傷過程中的作用研究[D];蘭州大學;2011年

3 張曉延;腸道病毒71型誘導細胞自噬、凋亡及相互調(diào)控關(guān)系的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2011年

4 馮文峰;血小板中自噬發(fā)生及功能研究[D];浙江大學;2012年

5 高靈素;自噬對多發(fā)性骨髓瘤細胞生存及增殖的影響及其可能機制[D];蘇州大學;2012年

6 周蜜;自噬與慢性阻塞性肺疾病[D];重慶醫(yī)科大學;2013年

7 李媛媛;奧沙利鉑誘導人肝癌細胞株自噬潮的增加及其對細胞活力的影響[D];安徽醫(yī)科大學;2013年

8 劉宣宣;鎘誘導人肝腎細胞自噬及相關(guān)蛋白作用初步研究[D];南京師范大學;2013年

9 陳清鳳;工頻磁場對中國倉鼠肺成纖維細胞自噬的誘導作用[D];浙江大學;2011年

10 解艷艷;腫瘤細胞自噬與腫瘤細胞抗藥性機理的初步研究[D];山東大學;2012年

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