目的:探討Toll樣受體4(TLR4)/Nod樣受體蛋白3(NLRP3)炎癥復(fù)合體是否介導(dǎo)了對(duì)比劑(CM)引起的腎小管上皮細(xì)胞炎癥和損傷。方法:本研究運(yùn)用碘普羅胺作用于大鼠腎小管上皮細(xì)胞NRK-52E建立損傷模型。應(yīng)用CCK-8法測(cè)定細(xì)胞存活率;Western blot測(cè)定TLR4、NLRP3、凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白(ASC)、caspase-1和cleaved caspase-3的蛋白水平;ELISA法檢測(cè)炎癥因子白細(xì)胞介素1β(IL-1β)和IL-18的水平;Hoechst 33258核染色法檢測(cè)凋亡率;JC-1染色法測(cè)定線粒體膜電位。用小干擾RNA沉默NLRP3表達(dá)。結(jié)果:CM可降低NRK-52E細(xì)胞的存活率并上調(diào)cleaved caspase-3的蛋白水平(P<0.05);此外,CM可上調(diào)細(xì)胞TLR4/NLRP3炎癥復(fù)合體的表達(dá)并促進(jìn)炎癥因子IL-1β和IL-18的分泌(P<0.05)。沉默NLRP3可以對(duì)抗CM誘導(dǎo)的炎癥因子分泌;TLR4抑制劑TAK-242及沉默NLRP3能減輕CM引起的細(xì)胞凋亡和線粒體功能損傷。結(jié)論:TLR4/NLRP3炎癥復(fù)合體參與了CM致急性腎...

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【文章目錄】：
材料和方法
    1 材料
    2 方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2 損傷模型的建立及實(shí)驗(yàn)分組
        2.3 CCK-8法測(cè)定細(xì)胞存活率
        2.4 Western blot檢測(cè)TLR4、NLRP3、ASC、caspase-1和cleaved caspase-3的蛋白水平
        2.5 ELISA法檢測(cè)炎癥因子IL-1β和IL-18的分泌水平
        2.7 Hoechst 33258核染色熒光顯微鏡照相法測(cè)定凋亡細(xì)胞的數(shù)量
        2.8 JC-1染色熒光顯微鏡照相法檢測(cè)線粒體膜電位 (mitochondrial membrane potential, MMP)
    2.6 siRNA沉默NLRP3的表達(dá)
    3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
結(jié)果
    1CM降低NRK-52E細(xì)胞的存活率并上調(diào)cleaved caspase-3的蛋白水平
    2 CM上調(diào)NRK-52E細(xì)胞TLR4及NLRP3炎癥復(fù)合體的表達(dá)
    3 CM促進(jìn)NRK-52E細(xì)胞炎癥因子IL-1β和IL-18的分泌
    4 siRNA下調(diào)NRK-52E細(xì)胞內(nèi)NLRP3的表達(dá)
    5 沉默NLRP3對(duì)抗CM誘導(dǎo)的炎癥因子IL-1β和IL-18的分泌
    6 TAK-242及沉默NLRP3能減輕CM引起的NRK-52E細(xì)胞凋亡
    7 TAK-242及沉默NLRP3能減輕CM誘導(dǎo)的NRK-52E細(xì)胞線粒體功能損傷
討論



本文編號(hào)：3991713