發(fā)布時間：2020-11-03 04:50

　　 第一部分增齡對小鼠腎臟TXNIP表達及腎臟纖維化的影響目的:探討衰老與TXNIP表達及腎臟纖維化的關(guān)系。方法:實驗選用C57BL/6J雄性小鼠并隨機均分為兩組:正常對照組(NC組n=18)和高脂高糖組(HFGD組n=18),兩組再分別留取3、9、18月齡腎臟組織和血液標本,檢測各年齡段各組小鼠腎臟功能生化指標及TXNIP、衰老相關(guān)蛋白P16、腎臟纖維化相關(guān)蛋白α-SMA及TGF-β1的表達水平,石蠟切片行HE、Masson及PAS染色觀察腎臟纖維化及病理變化。結(jié)果:隨著年齡增加,小鼠腎臟石蠟切片病理染色結(jié)果出現(xiàn)腎小球硬化、腎小管結(jié)構(gòu)模糊破壞及腎臟纖維化改變,血清血肌酐、尿素氮逐漸升高(P0.05),腎臟組織中TXNIP、P16、α-SMA及TGF-β1表達上調(diào)(P0.05);而同年齡段小鼠經(jīng)高脂高糖飼養(yǎng)后,腎臟病理染色結(jié)果中腎小球硬化、腎小管萎縮及腎臟纖維化表現(xiàn)加重,血清血肌酐、尿素氮明顯升高(P0.05),腎臟組織TXNIP、P16、α-SMA及TGF-β1表達也明顯上調(diào)(P0.05)。結(jié)論:隨著年齡增加,腎臟組織出現(xiàn)衰老及纖維化表現(xiàn),促進了TXNIP在腎臟組織中表達,而高脂高糖加重衰老導致的腎臟組織TXNIP表達上調(diào),同時加重衰老相關(guān)的腎臟纖維化表現(xiàn)及腎臟功能障礙。衰老促進腎臟TXNIP表達,而TXNIP表達上調(diào)是否加重腎臟衰老及纖維化仍需進一步實驗探討。第二部分TXNIP與腎臟衰老相關(guān)纖維化的關(guān)系目的:探討TXNIP介導小鼠腎臟衰老相關(guān)纖維化的作用方法:將C57BL/6J雄性小鼠(WT n=18)和TXNIP基因敲除雄性小鼠(TXNIP-/-n=18)普通飲食飼養(yǎng),留取3、9、18月齡腎臟組織和血液標本,檢測兩組小鼠各年齡段腎臟功能,通過Western-blot和免疫熒光法檢測TXNIP、衰老相關(guān)蛋白P16、纖維化相關(guān)蛋白α-SMA及TGF-β1在腎臟的表達水平,石蠟切片行HE、Masson及PAS染色觀察腎臟纖維化及病理變化。結(jié)果:與同年齡段小鼠相比,敲除TXNIP基因可以明顯改善腎臟衰老及纖維化表現(xiàn),血清血肌酐、尿素氮明顯下降(P0.05),同時腎臟組織P16、α-SMA及TGF-β1表達也明顯減少(P0.05)。結(jié)論:TXNIP促進腎臟衰老,加速腎臟纖維化進程,敲除TXNIP可以改善衰老相關(guān)的腎臟纖維化,下調(diào)α-SMA及TGF-β1表達。第三部分TXNIP介導腎臟衰老相關(guān)纖維化的機制研究目的:探討TXNIP對腎小管上皮細胞促纖維化反應的作用及相關(guān)機制方法:使用陰性對照病毒(LV-GFP)、TXNIP過表達病毒(LV-TXNIP)及TXNIP沉默病毒(LV-TXNIP-si RNA)分別轉(zhuǎn)染人腎小管上皮細胞(HK-2),分為三組,用Western-blot和免疫熒光法檢測TXNIP、衰老相關(guān)蛋白P16、纖維化相關(guān)蛋白在腎臟的表達情況。通過Western-blot檢測STAT3通路和TGF-β1/SMAD3信號通路磷酸化水平,并采用免疫共沉淀法檢驗TXNIP與STAT3是否存在一定相互作用。結(jié)果:轉(zhuǎn)染TXNIP過表達病毒后,腎小管上皮細胞內(nèi)衰老相關(guān)蛋白P16、纖維化蛋白TGF-β1較陰性對照組明顯上調(diào)(P0.05),STAT3信號通路及SAMD3通路磷酸化水平明顯上調(diào)(P0.05),下游纖維化蛋白α-SMA及CollagenⅠ蛋白明顯上調(diào)(P0.05)。而轉(zhuǎn)染TXNIP沉默病毒后,細胞內(nèi)衰老相關(guān)蛋白P16、腎臟纖維化蛋白TGF-β1較陰性對照組明顯減少(P0.05),STAT3信號通路及SAMD3通路磷酸化水平明顯下降(P0.05),其下游蛋白α-SMA及CollagenⅠ蛋白明顯下調(diào)(P0.05)。其次,STAT3特異性抑制劑作用于小管上皮細胞后,過表達組細胞內(nèi)的TGF-β1、α-SMA、CollagenⅠ蛋白及SAMD3磷酸化水平明顯下調(diào)(P0.05)。此外,免疫共沉淀結(jié)果顯示TXNIP與STAT3存在一定相互作用。結(jié)論:過表達TXNIP能促進腎小管上皮細胞內(nèi)衰老相關(guān)蛋白P16上調(diào),同時可能激活STAT3信號通路,上調(diào)TGF-β1表達水平,從而通過激活SMAD3信號通路,使腎小管上皮細胞內(nèi)纖維化蛋白表達上調(diào),發(fā)生促纖維化改變。而敲低TXNIP可以抑制STAT3磷酸化,下調(diào)TGF-β1/SMAD3表達,抑制腎小管上皮細胞促纖維化反應。結(jié)合免疫共沉淀結(jié)果,說明TXNIP能夠促進腎小管上皮細胞促纖維化反應,可能與激活STAT3信號通路,上調(diào)TGF-β1/SMAD3表達有關(guān)。
【學位單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R692
【文章目錄】：
英漢縮略語名詞對照
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 增齡對小鼠腎臟TXNIP表達及腎臟纖維化的影響
    1 實驗材料
    2 實驗方法
    3 實驗結(jié)果
    4 討論
第二部分 TXNIP與腎臟衰老相關(guān)纖維化的關(guān)系
    1 實驗材料
    2 實驗方法
    3 實驗結(jié)果
    4 討論
第三部分 TXNIP介導腎臟衰老相關(guān)纖維化的機制研究
    1 實驗材料
    2 實驗方法
    3 實驗結(jié)果
    4 討論
全文總結(jié)
參考文獻
文獻綜述：細胞衰老在腎臟疾病中的作用與機制
    參考文獻
致謝
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本文編號：2868117