為了進(jìn)一步了解1型鴨甲型肝炎病毒(DHAV-1)的致病性,分析其近年來基因序列的變化,本實(shí)驗(yàn)對2018年取自山東某鴨場疑似發(fā)病鴨臟器進(jìn)行病毒分離,RT-PCR鑒定,基因組序列測定和進(jìn)化樹分析,分離得到3株DHAV-1,并進(jìn)行動物回歸試驗(yàn)以研究3株病毒的致病力和在雛鴨各臟器內(nèi)復(fù)制能力。將病料處理后接種鴨胚,收取24h到96h死亡的鴨胚尿囊液進(jìn)行RT-PCR檢測,結(jié)果顯示1型鴨肝炎病毒PCR檢測為陽性。將3株病毒分別命名為:SD37、SD63、SE5。通過全基因組測序和進(jìn)化樹分析,3株分離病毒株與2011到2016年分離的參考毒株同源性為97.8%到99.2%。3株病毒VP1基因的序列同源性為94.3%到99.9%。動物回歸實(shí)驗(yàn),分別對3株病毒通過滴鼻方式攻毒同時設(shè)對照組,SD37的存活率為0%,SD63為87.5%,SE5為100%,用鴨胚滴定和實(shí)時熒光定量PCR的方法對臟器病毒滴度測定,臟器病毒含量由高到低為肝、脾、腎。對山東地區(qū)分離的三株病毒分析結(jié)果表明,不同毒株間存在抗原性差異,毒力存在強(qiáng)弱差異,SD37的毒力最強(qiáng),SD63和SE5的毒力較弱,病毒在肝臟中復(fù)制能力強(qiáng)。

【文章頁數(shù)】：44 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
1 引言
    1.1 鴨病毒性肝炎的發(fā)現(xiàn)和歷史
    1.2 鴨肝炎病毒的分型
    1.3 鴨肝炎Ⅰ型病毒的理化特性
    1.4 分子生物學(xué)特征
    1.5 病毒的宿主
    1.6 病毒的傳播途徑
    1.7 致病機(jī)理
    1.8 鴨病毒性肝炎的診斷
        1.8.1 臨床癥狀的初步診斷
        1.8.2 病原學(xué)診斷
        1.8.3 電鏡觀察
        1.8.4 血清學(xué)診斷
        1.8.5 熒光抗體技術(shù)
        1.8.6 免疫組織化學(xué)法
        1.8.7 分子生物學(xué)技術(shù)診斷
    1.9 預(yù)防及治療
        1.9.1 預(yù)防
        1.9.2 治療
    1.10 本研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 病料的收集
        2.1.2 鴨胚及雛鴨
        2.1.3 基因組參考序列
        2.1.4 主要試劑
        2.1.5 儀器
    2.2 方法
        2.2.1 病料的處理
        2.2.2 病毒的分離與培養(yǎng)
        2.2.3 病毒鴨胚半數(shù)致死量的測定
        2.2.4 病毒的PCR檢測
        2.2.5 DHAV-1全基因組測序
        2.2.6 動物回歸實(shí)驗(yàn)
3 結(jié)果
    3.1 病毒分離結(jié)果
    3.2 分離毒株的ELD₅₀測定結(jié)果
    3.3 分離病毒的PCR鑒定結(jié)果
    3.4 三株DHAV-1全基因組測序與序列分析
        3.4.1 全基因序列測定結(jié)果
        3.4.2 全基因序列同源性比較分析
        3.4.3 全基因組進(jìn)化樹分析
        3.4.4 VP1基因同源性分析
        3.4.5 VP1基因進(jìn)化樹分析
        3.4.6 強(qiáng)弱毒株的VP1基因及其氨基酸序列比較分析
    3.5 動物回歸試驗(yàn)結(jié)果
        3.5.1 動物試驗(yàn)雛鴨存活率的統(tǒng)計結(jié)果
        3.5.2 攻毒雛鴨的解剖與臟器病理變化
        3.5.3 DHAV-1攻毒雛鴨臟器病毒鴨胚ELD₅₀測定結(jié)果
        3.5.4 DHAV-1攻毒雛鴨臟器病毒含量熒光定量PCR測定結(jié)果
4 討論
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
作者簡介



本文編號：4056734