外排體(exoxome)是來源于真核細(xì)胞的納米級(jí)小囊泡,含有多種生物活性分子,在細(xì)胞間物質(zhì)和信息交流中發(fā)揮重要作用。最近的研究資料顯示,外排體也是人和鼠源細(xì)胞小干擾RNA (small interfering RNA, siRNA)和微小RNA (microRNA,miRNA)的傳遞機(jī)制之一,但能否在豬等哺乳動(dòng)物細(xì)胞間傳遞尚無報(bào)道。 為了闡明外排體能否在豬源細(xì)胞間傳遞干擾RNA,本研究首先構(gòu)建表達(dá)豬繁殖與呼吸綜合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)3’非翻譯區(qū)(UTR)特異性人工miRNA (amiRNA)的重組腺病毒rAd-amiR3UTR-EIRES-GFP和表達(dá)對(duì)照amiRNA的重組腺病毒rAd-amiRcon-EIRES-GFP。電鏡觀察結(jié)果顯示兩種重組腺病毒具有典型的腺病毒形態(tài)；經(jīng)PCR檢測(cè)證明重組病毒基因組含amiRNA表達(dá)盒；經(jīng)RT-PCR檢測(cè)證明重組腺病毒能感染豬源細(xì)胞并表達(dá)序列特異性amiRNA。 分別用rAd-amiR3UTR-EIRES-GFP和rAd-amiRcon-...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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圖1miRNA發(fā)生及其作用機(jī)制Fig.1miRNAandit'smechanismofactionoccurs

圖1miRNA發(fā)生及其作用機(jī)制Fig.1miRNAandit'smechanismofactionoccurs

圖2外排體的形成Fig.2generationofexosomes

泡體與質(zhì)膜融合，這一循環(huán)過程使通過外排體介導(dǎo)、無需細(xì)胞一細(xì)胞直接接觸的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)成為可能[26\圖2)。OK)⑩一卷.瘦r一45—丄 MVB與溶酶體磁合 釋放內(nèi)含物溶_腳1圖2外排體的形成Fig.2generationofexosomes2.3外排體與病毒外排體作為細(xì)....

圖2PRRSV病毒粒子的結(jié)構(gòu)模式圖

圖2PRRSV病毒粒子的結(jié)構(gòu)模式圖Fig.2SchematicrepresentationofthePRRSvirus0RF2?7編碼的病毒蛋白有M蛋白、N蛋白、糖基化囊膜蛋白。糖基化囊膜蛋白P2、GP3、GP4、GP5四種，分別是由0RF2、0RF3、0RF....

圖1-1同源重組腺病毒構(gòu)建方法

按AdEasy系統(tǒng)進(jìn)行重組腺病毒的制備、包裝pShuttle-amiR3UTR-GFP和pShuttle-amiRcon-GFP[2](圖1-1)，獲得重組腺病毒rAd-amiR3UTR-GFP和rAd-amiRcon-GFP。iCon 沉條Encopsidation

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