子宮內(nèi)膜炎可導(dǎo)致奶牛受孕延遲、不孕癥和產(chǎn)奶量下降。細(xì)菌感染是奶牛子宮內(nèi)膜炎的主要病因。臨床上常使用抗生素治療該病,但因子宮內(nèi)膜的炎性損傷不能完全修復(fù),影響奶牛的再孕率。由于對金黃色葡萄球菌感染引起奶牛子宮內(nèi)膜炎的分子機(jī)制尚不完全清楚,制約了對該病的防治效果。研究表明,前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)參與多種炎癥反應(yīng)的過程,PGE2可通過調(diào)控具有血管再生作用的IL-8的表達(dá),在人子宮內(nèi)膜修復(fù)過程中發(fā)揮重要的作用。本試驗(yàn)通過對PGE2在金黃色葡萄球菌所致奶牛子宮內(nèi)膜組織炎癥反應(yīng)中的作用及機(jī)制的研究,以闡明葡萄球菌性奶牛子宮內(nèi)膜炎的分子機(jī)制。具體研究內(nèi)容及結(jié)果如下:1.為建立體外培養(yǎng)奶牛子宮內(nèi)膜組織在細(xì)菌性奶牛子宮內(nèi)膜炎的研究方法,本試驗(yàn)分別使用不同濃度的熱滅活金黃色葡萄球菌作用于體外培養(yǎng)的奶牛子宮內(nèi)膜組織,通過qPCR檢測受作奶牛子宮內(nèi)膜組織中促炎性細(xì)胞因子IL-6、TNF-α mRNA表達(dá)量。結(jié)果顯示:熱滅活的金黃色葡萄球菌作用于體外培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜組織后,IL-6、TNF-αmRNA表達(dá)量均顯著高于空白對照組(P<0.05)。這與細(xì)菌性奶牛子宮內(nèi)膜炎發(fā)生時,...

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【學(xué)位級別】：博士

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摘要
Abstract
1 引言
    1.1 奶牛子宮內(nèi)膜炎
    1.2 奶牛子宮內(nèi)膜炎的分類
        1.2.1 臨床型奶牛子宮內(nèi)膜炎
        1.2.2 亞臨床型奶牛子宮內(nèi)膜炎
    1.3 引起奶牛子宮內(nèi)膜炎常見的細(xì)菌
    1.4 金黃色葡萄球菌在奶牛子宮內(nèi)膜炎中的研究現(xiàn)狀
    1.5 金黃色葡萄球菌致病機(jī)理
        1.5.1 金黃色葡萄球菌的毒力因子
        1.5.2 金黃色葡萄球菌的免疫逃避
        1.5.3 金黃色葡萄球菌的耐藥性
    1.6 奶牛子宮對病原微生物的抵御機(jī)制
        1.6.1 子宮內(nèi)體液免疫反應(yīng)
        1.6.2 免疫細(xì)胞反應(yīng)
        1.6.3 釋放細(xì)胞因子
    1.7 調(diào)控免疫反應(yīng)的細(xì)胞膜受體及其信號通路
        1.7.1 Toll樣受體
        1.7.2 MAPKs細(xì)胞信號通路
        1.7.3 NF-κB信號通路
        1.7.4 TLR2、MAPK、NF-κB的相互關(guān)聯(lián)
        1.7.5 類固醇類激素調(diào)控子宮內(nèi)免疫反應(yīng)
    1.8 PGE2的合成與降解過程及其在炎癥反應(yīng)中的作用
        1.8.1 PGE2的合成與降解過程
        1.8.2 PGE2及其受體對炎癥反應(yīng)的調(diào)控
    1.9 致病菌引起的奶牛子宮內(nèi)膜組織損傷及評價損傷的相關(guān)因子
        1.9.1 致病菌感染引起的組織損傷
        1.9.2 評價損傷的相關(guān)因子
    1.10 本研究的目的及意義
2 研究一 金黃色葡萄球菌對奶牛子宮內(nèi)膜組織中促炎性細(xì)胞因子表達(dá)的影響
    2.1 試驗(yàn)材料與主要儀器設(shè)備
        2.1.1 試驗(yàn)材料
        2.1.2 試驗(yàn)設(shè)備及主要儀器
        2.1.3 試驗(yàn)所用試劑
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 奶牛子宮內(nèi)膜組織體外培養(yǎng)方法
        2.2.2 金黃色葡萄球菌的活化及生長曲線的繪制方法
        2.2.3 菌落計數(shù)方法
        2.2.4 制備熱滅活的金黃色葡萄球菌
        2.2.5 金黃色葡萄球菌體外刺激奶牛子宮內(nèi)膜組織試驗(yàn)
    2.3 試驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 金黃色葡萄球菌生長曲線
        2.3.2 金黃色葡萄球菌菌落形態(tài)
        2.3.3 熒光定量PCR溶解曲線
        2.3.4 金黃色葡萄球菌對奶牛子宮內(nèi)膜組織中IL-6、TNF-α mRNA表達(dá)影響
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
3 研究二 金黃色葡萄球菌誘導(dǎo)奶牛子宮內(nèi)膜組織炎癥相關(guān)因子表達(dá)中PGE的作用
    3.1 試驗(yàn)材料與主要儀器設(shè)備
        3.1.1 試驗(yàn)材料
        3.1.2 試驗(yàn)主要儀器設(shè)備
        3.1.3 試驗(yàn)所用試劑
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 奶牛子宮內(nèi)膜組織的體外培養(yǎng)
        3.2.2 金黃色葡萄球菌處理奶牛子宮內(nèi)膜組織
        3.2.3 抑制劑與激動劑處理奶牛子宮內(nèi)膜組織
        3.2.4 奶牛子宮內(nèi)膜組織總RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
        3.2.5 熒光定量PCR反應(yīng)
        3.2.6 Elisa檢測PGE₂、IL-6與TNF-α的分泌量
        3.2.7 奶牛子宮內(nèi)膜組織總蛋白的提取
        3.2.8 蛋白樣品的處理
        3.2.9 western blot
        3.2.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
    3.3 試驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 試驗(yàn)所用抑制劑、激動劑、阻斷劑對子宮內(nèi)膜中COX-2表達(dá)及PGE₂分泌的影響
        3.3.2 金黃色葡萄球菌對奶牛子宮內(nèi)膜組織中PGE₂合成的影響
        3.3.3 SB202190對熱滅活金黃色葡萄球菌刺激組織中p38 MAPK表達(dá)的影響
        3.3.4 PGE2對金黃色葡萄球菌刺激后的奶牛子宮內(nèi)膜組織中IL-6與TNF-α的影響
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
4 研究三金黃色葡萄球菌所致奶牛子宮內(nèi)膜組織損傷過程中PGE2的調(diào)控作用
    4.1 試驗(yàn)材料與主要儀器設(shè)備
        4.1.1 試驗(yàn)材料
        4.1.2 試驗(yàn)主要儀器設(shè)備
        4.1.3 試驗(yàn)所用試劑
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 奶牛子宮內(nèi)膜組織的體外培養(yǎng)
        4.2.2 金黃色葡萄球菌處理奶牛子宮內(nèi)膜組織
        4.2.3 抑制劑與激動劑處理奶牛子宮內(nèi)膜組織
        4.2.4 奶牛子宮內(nèi)膜組織總RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
        4.2.5 熒光定量PCR反應(yīng)
        4.2.6 western-blot
        4.2.7 制作奶牛子宮內(nèi)膜組織H.E染色切片
        4.2.8 制作奶牛子宮內(nèi)膜組織冰凍切片
        4.2.9 免疫熒光染色
        4.2.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
    4.3 試驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 PGE₂對金黃色葡萄球菌刺激后的奶牛子宮內(nèi)膜組織中HMGB-1、HABP-1 mRNA和蛋白表達(dá)的影響
        4.3.2 PGE₂對金黃色葡萄球菌刺激后的奶牛子宮內(nèi)膜組織中HMGB-1、HABP-1 熒光表達(dá)的影響
        4.3.3 PGE₂對金黃色葡萄球菌引起奶牛子宮內(nèi)膜組織損傷的影響
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
5 研究四 金黃色葡萄球菌的活菌和熱滅活菌對奶牛子宮內(nèi)膜組織炎性因子表達(dá)的影響
    5.1 試驗(yàn)材料與主要儀器設(shè)備
        5.1.1 試驗(yàn)材料
        5.1.2 試驗(yàn)主要儀器設(shè)備
        5.1.3 試驗(yàn)所用試劑
    5.2 試驗(yàn)方法
        5.2.1 體外培養(yǎng)奶牛子宮內(nèi)膜組織
        5.2.2 不同細(xì)菌感染體外培養(yǎng)的奶牛子宮內(nèi)膜組織
        5.2.3 奶牛子宮內(nèi)膜組織總RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
        5.2.4 熒光定量PCR反應(yīng)
        5.2.5 western blot
    5.3 試驗(yàn)結(jié)果
        5.3.1 LSA和HK-SA對奶牛子宮內(nèi)膜組織IL-6和IL-1β表達(dá)的影響
        5.3.2 LSA和HK-SA對奶牛子宮內(nèi)膜組織TLR2受體表達(dá)的影響
        5.3.3 LSA和大腸桿菌混合感染對奶牛子宮內(nèi)膜組織IL-6、IL-1β表達(dá)的影響
        5.3.4 LSA和HK-SA感染對奶牛子宮內(nèi)膜組織中COX-2和mPGES-1表達(dá)的影響
        5.3.5 LSA和HK-SA感染對奶牛子宮內(nèi)膜組織PGE2和cAMP生成及EP4受體表達(dá)的影響
        5.3.6 LSA和HK-SA感染對奶牛子宮內(nèi)膜組織相關(guān)信號通路的影響
    5.4 討論
    5.5 小結(jié)
6 全文結(jié)論
7 創(chuàng)新性
致謝
參考文獻(xiàn)
作者簡介



本文編號：4047503