禽4型腺病毒(Fowl adenovirus serotype-4,FAdV-4)對雞具有較強的致病性,特別是對3至5周齡的肉雞,可導(dǎo)致30-80%死亡率,它已成為近30年來導(dǎo)致家禽行業(yè)經(jīng)濟損失的主要原因之一。肝臟組織是FAdV-4感染的主要靶器官,而感染病毒的雞通常表現(xiàn)為心包積液綜合征(hydropericardium syndrome,HPS),典型癥狀為心包中有清澈的、淡黃色的液體聚集,并伴有肝炎和腎炎。FAd V-4有很強的感染性,可以水平傳播,也可以垂直傳播。FAdV-4可以從受感染的肝勻漿中分離出來,并可通過幾種實驗室診斷方法檢測(瓊脂凝膠擴散試驗,間接免疫熒光試驗,ELISA,限制性酶切和PCR)。盡管組織滅活疫苗已經(jīng)應(yīng)用于控制這種疾病,但新型疫苗可能能夠更好的防控FAdV-4造成的疫病,本文研究了FAdV-4的不同來源的亞單位疫苗,研究結(jié)果如下。1.FAdV-4的分離與鑒定2015年10月采集陜西省大荔縣某肉雞養(yǎng)殖場HPS疑似病料經(jīng)勻漿處理,接種雞胚、CEF細胞、LMH細胞對病原分離培養(yǎng),經(jīng)PCR、間接免疫熒光、透射電子顯微鏡和動物回歸試驗對病原體進行鑒定。結(jié)果顯示可用...

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
文獻綜述
    第一章 禽4型腺病毒的研究進展
        1.1 禽4型腺病毒的概述
            1.1.1 FAdV-4的分類地位、結(jié)構(gòu)和理化特征
            1.1.2 FAdV-4的流行病學(xué)
            1.1.3 FAdV-4的發(fā)病機理
        1.2 FAdV-4的診斷
            1.2.1 臨床病理分析和透射電鏡
            1.2.2 分子技術(shù)
            1.2.3 血清學(xué)技術(shù)
        1.3 病毒的分離純化
        1.4 FAdV-4的疫苗
        1.5 腺病毒的病毒樣顆粒
            1.5.1 腺病毒病毒樣顆粒的概述
            1.5.2 Ad3Pt-Dd的入胞機制
            1.5.3 Ad3Pt-Dd在疫苗研究領(lǐng)域的應(yīng)用
            1.5.4 腺病毒的病毒樣顆粒作為亞單位疫苗
試驗研究
    第二章 FAdV-4的分離鑒定
        2.1 材料
            2.1.1 病料
            2.1.2 細胞、雞胚和試驗動物
            2.1.3 試劑
            2.1.4 試驗儀器
        2.2 方法
            2.2.1 分子生物學(xué)鑒定
            2.2.2 病毒分離
            2.2.3 動物回歸試驗
        2.3 結(jié)果
            2.3.1 分子生物學(xué)鑒定
            2.3.2 病毒分離鑒定
            2.3.3 遺傳進化分析
            2.3.4 動物回歸試驗
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
    第三章 FAdV-4的衣殼蛋白fiber-1、fiber-2、pentonbase和hexon的免疫保護力
        3.1 材料
            3.1.1 病毒,細菌菌株,細胞株及試劑
            3.1.2 試驗動物
            3.1.3 試劑
            3.1.4 儀器
        3.2 方法
            3.2.1 重組質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
            3.2.2 重組蛋白的表達與純化
            3.2.3 Westernblot
            3.2.4 免疫和攻毒試驗
            3.2.5 組織病理學(xué)觀察及免疫組織化學(xué)檢測組織病毒分布
            3.2.6 酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)
            3.2.7 統(tǒng)計分析
        3.3 結(jié)果
            3.3.1 重組質(zhì)粒的構(gòu)建與蛋白表達
            3.3.2 重組蛋白免疫后的體液免疫應(yīng)答
            3.3.3 臨床癥狀與存活率
            3.3.4 剖檢病理變化觀察
            3.3.5 微觀病變
        3.4 討論
        3.5 小結(jié)
    第四章 FAdV-4病毒樣顆粒的免疫保護力
        4.1 材料
            4.1.1 細胞和病毒
        4.2 方法
            4.2.1 構(gòu)建重組腺病毒(rhAd-fiber-1、rhAd-fiber-2、rhAd-penton)
            4.2.2 Westernblot
            4.2.3 電鏡負染
            4.2.4 轉(zhuǎn)導(dǎo)293T細胞
            4.2.5 FAdV-4VLPs的內(nèi)化
            4.2.6 免疫和攻毒試驗
            4.2.7 組織病理學(xué)觀察及免疫組織化學(xué)檢測組織病毒分布
            4.2.8 酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)
            4.2.9 分離外周血單核細胞
        4.3 結(jié)果
            4.3.1 構(gòu)建重組腺病毒(rhAd-fiber-1、rhAd-fiber-2、rhAd-penton)
            4.3.2 生成FAdV-4病毒樣顆粒
            4.3.3 FAdV-4VLPs的內(nèi)化
            4.3.4 重組蛋白免疫后的細胞和體液免疫應(yīng)答
            4.3.5 剖檢病理變化觀察
            4.3.6 組織病理學(xué)和免疫組織化學(xué)分析
            4.3.7 攻毒保護性試驗
        4.4 討論
        4.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
附錄
致謝
作者簡介



本文編號：4003585