禽4型腺病毒(Fowl adenovirus serotype-4,FAdV-4)對(duì)雞具有較強(qiáng)的致病性,特別是對(duì)3至5周齡的肉雞,可導(dǎo)致30-80%死亡率,它已成為近30年來(lái)導(dǎo)致家禽行業(yè)經(jīng)濟(jì)損失的主要原因之一。肝臟組織是FAdV-4感染的主要靶器官,而感染病毒的雞通常表現(xiàn)為心包積液綜合征(hydropericardium syndrome,HPS),典型癥狀為心包中有清澈的、淡黃色的液體聚集,并伴有肝炎和腎炎。FAd V-4有很強(qiáng)的感染性,可以水平傳播,也可以垂直傳播。FAdV-4可以從受感染的肝勻漿中分離出來(lái),并可通過(guò)幾種實(shí)驗(yàn)室診斷方法檢測(cè)(瓊脂凝膠擴(kuò)散試驗(yàn),間接免疫熒光試驗(yàn),ELISA,限制性酶切和PCR)。盡管組織滅活疫苗已經(jīng)應(yīng)用于控制這種疾病,但新型疫苗可能能夠更好的防控FAdV-4造成的疫病,本文研究了FAdV-4的不同來(lái)源的亞單位疫苗,研究結(jié)果如下。1.FAdV-4的分離與鑒定2015年10月采集陜西省大荔縣某肉雞養(yǎng)殖場(chǎng)HPS疑似病料經(jīng)勻漿處理,接種雞胚、CEF細(xì)胞、LMH細(xì)胞對(duì)病原分離培養(yǎng),經(jīng)PCR、間接免疫熒光、透射電子顯微鏡和動(dòng)物回歸試驗(yàn)對(duì)病原體進(jìn)行鑒定。結(jié)果顯示可用...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
文獻(xiàn)綜述
    第一章 禽4型腺病毒的研究進(jìn)展
        1.1 禽4型腺病毒的概述
            1.1.1 FAdV-4的分類地位、結(jié)構(gòu)和理化特征
            1.1.2 FAdV-4的流行病學(xué)
            1.1.3 FAdV-4的發(fā)病機(jī)理
        1.2 FAdV-4的診斷
            1.2.1 臨床病理分析和透射電鏡
            1.2.2 分子技術(shù)
            1.2.3 血清學(xué)技術(shù)
        1.3 病毒的分離純化
        1.4 FAdV-4的疫苗
        1.5 腺病毒的病毒樣顆粒
            1.5.1 腺病毒病毒樣顆粒的概述
            1.5.2 Ad3Pt-Dd的入胞機(jī)制
            1.5.3 Ad3Pt-Dd在疫苗研究領(lǐng)域的應(yīng)用
            1.5.4 腺病毒的病毒樣顆粒作為亞單位疫苗
試驗(yàn)研究
    第二章 FAdV-4的分離鑒定
        2.1 材料
            2.1.1 病料
            2.1.2 細(xì)胞、雞胚和試驗(yàn)動(dòng)物
            2.1.3 試劑
            2.1.4 試驗(yàn)儀器
        2.2 方法
            2.2.1 分子生物學(xué)鑒定
            2.2.2 病毒分離
            2.2.3 動(dòng)物回歸試驗(yàn)
        2.3 結(jié)果
            2.3.1 分子生物學(xué)鑒定
            2.3.2 病毒分離鑒定
            2.3.3 遺傳進(jìn)化分析
            2.3.4 動(dòng)物回歸試驗(yàn)
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
    第三章 FAdV-4的衣殼蛋白fiber-1、fiber-2、pentonbase和hexon的免疫保護(hù)力
        3.1 材料
            3.1.1 病毒,細(xì)菌菌株,細(xì)胞株及試劑
            3.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物
            3.1.3 試劑
            3.1.4 儀器
        3.2 方法
            3.2.1 重組質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
            3.2.2 重組蛋白的表達(dá)與純化
            3.2.3 Westernblot
            3.2.4 免疫和攻毒試驗(yàn)
            3.2.5 組織病理學(xué)觀察及免疫組織化學(xué)檢測(cè)組織病毒分布
            3.2.6 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)
            3.2.7 統(tǒng)計(jì)分析
        3.3 結(jié)果
            3.3.1 重組質(zhì)粒的構(gòu)建與蛋白表達(dá)
            3.3.2 重組蛋白免疫后的體液免疫應(yīng)答
            3.3.3 臨床癥狀與存活率
            3.3.4 剖檢病理變化觀察
            3.3.5 微觀病變
        3.4 討論
        3.5 小結(jié)
    第四章 FAdV-4病毒樣顆粒的免疫保護(hù)力
        4.1 材料
            4.1.1 細(xì)胞和病毒
        4.2 方法
            4.2.1 構(gòu)建重組腺病毒(rhAd-fiber-1、rhAd-fiber-2、rhAd-penton)
            4.2.2 Westernblot
            4.2.3 電鏡負(fù)染
            4.2.4 轉(zhuǎn)導(dǎo)293T細(xì)胞
            4.2.5 FAdV-4VLPs的內(nèi)化
            4.2.6 免疫和攻毒試驗(yàn)
            4.2.7 組織病理學(xué)觀察及免疫組織化學(xué)檢測(cè)組織病毒分布
            4.2.8 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)
            4.2.9 分離外周血單核細(xì)胞
        4.3 結(jié)果
            4.3.1 構(gòu)建重組腺病毒(rhAd-fiber-1、rhAd-fiber-2、rhAd-penton)
            4.3.2 生成FAdV-4病毒樣顆粒
            4.3.3 FAdV-4VLPs的內(nèi)化
            4.3.4 重組蛋白免疫后的細(xì)胞和體液免疫應(yīng)答
            4.3.5 剖檢病理變化觀察
            4.3.6 組織病理學(xué)和免疫組織化學(xué)分析
            4.3.7 攻毒保護(hù)性試驗(yàn)
        4.4 討論
        4.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：4003585