發(fā)布時間：2024-07-07 09:55

　　目的：本實驗以延邊奶山羊的乳腺上皮細胞作為實驗材料,確定最合適體外培養(yǎng)延邊奶山羊乳腺上皮細胞的最佳條件,并探究延邊奶山羊乳腺上皮細胞在受到外源過氧化氫給予的氧化應(yīng)激刺激后,加入一定量的亞硒酸鈉以發(fā)揮其對乳腺上皮細胞的保護作用,并確定亞硒酸鈉對乳腺上皮細胞的最佳保護濃度。 方法：(1)分別用組織塊培養(yǎng)法和Ⅰ型膠原酶/透明質(zhì)酸酶消化法兩種方法建立延邊奶山羊乳腺上皮細胞,并對細胞進行純化,隨后對純化后的延邊奶山羊乳腺上皮細胞的骨架蛋白—角蛋白的表達情況進行檢測；(2)用體外培養(yǎng)的延邊奶山羊乳腺上皮細胞傳代后進行實驗。過氧化氫用DMEM/F12培養(yǎng)基分別稀釋為5、50、100、200、500μM,以DMEM/F12培養(yǎng)基作為空白對照組。過氧化氫處理4h后,用MTT法觀察過氧化氫對乳腺上皮細胞活力的影響,用Hoechst33342/PI熒光染色法觀察過氧化氫損傷對乳腺上皮細胞的凋亡情況,DCFH-DA檢測細胞內(nèi)ROS含量；(3)將延邊奶山羊乳腺上皮細胞分為3組：正常組(對照組1),過氧化氫損傷組(對照組2),亞硒酸鈉保護組。MTT方法檢測細胞活力,Hoechst33342/PI雙染、Giemsa...

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
    1.1 活性氧和自由基簡介
    1.2 ROS所引起的氧化應(yīng)激
    1.3 細胞內(nèi)抗氧化酶
    1.4 細胞培養(yǎng)中的氧化損傷
    1.5 亞硒酸鈉的研究進展
    1.6 乳腺組織結(jié)構(gòu)及乳腺上皮細胞的研究進展
    1.7 乳腺生物反應(yīng)器
    1.8 本實驗的目的及意義
實驗一 延邊奶山羊乳腺上皮細胞培養(yǎng)體系的建立及鑒定
    1 材料與方法
    2 結(jié)果與分析
    3 討論
    4 小結(jié)
實驗二 過氧化氫誘導(dǎo)延邊奶山羊乳腺上皮細胞氧化損傷模型的建立
    1 材料與方法
    2 結(jié)果與分析
    3 討論
    4 小結(jié)
實驗三 亞硒酸鈉對延邊奶山羊乳腺上皮細胞過氧化氫所致氧化損傷的保護作用
    1 材料與方法
    2 結(jié)果與分析
    3 討論
    4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
致謝
碩士期間論文發(fā)表情況



本文編號：4003534