為建立穩(wěn)定、可靠的微小隱孢子蟲(Cryptosporidium parvum)感染綿羊模型,將4只2日齡綿羊分成2組,分別經(jīng)口接種1×10⁶個(gè)(低劑量組)和1×10⁷個(gè)(高劑量組)的C.parvum卵囊,觀察綿羊每日精神狀況,并采集糞便樣品,提取DNA,用基于TaqMan探針的實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法進(jìn)行檢測,計(jì)算每日排卵囊數(shù)量。結(jié)果表明,兩組羔羊均從第4天開始出現(xiàn)精神沉郁、食欲下降及嚴(yán)重的腹瀉癥狀,鏡檢發(fā)現(xiàn)有大量的C.parvum卵囊排出,其中高劑量組的2只羔羊在感染后的第10天死亡。TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示,兩組羔羊均從第1天開始有少量的卵囊排出,從第5天開始增多。其中低劑量組的1#羔羊第9天達(dá)到高峰,2#羔羊第7天達(dá)到高峰,隨后排卵囊量開始下降,2只羔羊直到實(shí)驗(yàn)結(jié)束的第36天仍有卵囊排出,并且首次發(fā)現(xiàn)羔羊感染C.parvum后出現(xiàn)3個(gè)排卵囊高峰期。高劑量組的2只羔羊均在第6天達(dá)到高峰,其中3#羔羊第7天仍然有大量卵囊排出,4#羔羊第7天和第8天仍有大量卵囊排出,隨后開始下降;高劑量組羔羊高峰期排卵囊數(shù)量明顯高于低劑量組羔...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 蟲株
        1.1.2 試驗(yàn)用動物
        1.1.3 主要試劑
        1.1.4主要儀器設(shè)備
    1.2 方法
        1.2.1 微小隱孢子蟲卵囊的純化
        1.2.2 羔羊接種
        1.2.3 羔羊臨床癥狀觀察及糞便樣品鏡檢
        1.2.4 羔羊腸道病理組織學(xué)觀察
        1.2.5 糞便樣品的采集
        1.2.6 DNA的提取
        1.2.7 部分樣品的PCR鑒定
        1.2.8 微小隱孢子蟲SSU rDNA重組質(zhì)粒的制備
        1.2.9 糞便樣品的TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測
2 結(jié)果
    2.1 臨床癥狀觀察及鏡檢
    2.2 羔羊腸道組織病理學(xué)變化
    2.3 羔羊感染隱孢子蟲的分子鑒定
    2.4 微小隱孢子蟲TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
    2.5 羔羊排卵囊規(guī)律
3 討論



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