干擾素(IFN)是一種由單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子,在特定的誘生劑作用下,通過細(xì)胞基因組控制產(chǎn)生的一類糖蛋白,具有抗病毒、抗腫瘤及免疫調(diào)控等多種生物學(xué)活性。干擾素具體可以分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三種類型。Ⅰ型干擾素具有抗病毒和抗腫瘤作用,直接影響到人類和動物病毒病的免疫防治等,具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。相較于傳統(tǒng)誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的天然干擾素,基因工程干擾素的生物學(xué)活性與其高度相似,其優(yōu)點(diǎn)還有產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定、純度高、質(zhì)量易于控制、便于規(guī)�；a(chǎn)等。并且大規(guī)模生產(chǎn)使其生產(chǎn)成本大大降低,對其在現(xiàn)代寵物行業(yè)中的推廣與使用十分有利。本研究利用基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)制備出貓α和ω干擾素的重組蛋白并研究其抗病毒活性,為今后更深層次的臨床研究打下了堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ),為新型有效的動物抗病毒藥物的發(fā)現(xiàn)以及高效的基因工程干擾素制品的構(gòu)建提供了研究手段和理論依據(jù)。根據(jù)GeneBank上收錄的貓α和ω干擾素基因序列,檢測其信號肽部分并去除,得到編碼成熟蛋白的序列,依照大腸桿菌密碼子的兼并性及密碼子的偏好性,以不改變氨基酸排列順序和組成為前提,改造已知的基因序列,用大腸桿菌偏好的密碼子替換原有的密碼子,得到新的編碼貓...

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 干擾素研究概述
        1 干擾素的發(fā)現(xiàn)
        2 干擾素的分類及基本性質(zhì)
        3 干擾素的產(chǎn)生
        4 干擾素的分子結(jié)構(gòu)
        5 干擾素受體及其分布
            5.1 干擾素受體
            5.2 干擾素受體的分布
        6 干擾素的生物學(xué)功能及其機(jī)制
            6.1 干擾素抗病毒作用及機(jī)制
            6.2 干擾素抗腫瘤作用及機(jī)制
            6.3 干擾素免疫調(diào)節(jié)作用及機(jī)制
            6.4 干擾素控制細(xì)胞凋亡及機(jī)制
            6.5 干擾素的免疫佐劑作用
            6.6 干擾素的其他作用
        7 干擾素的研究進(jìn)展
        8 干擾素的應(yīng)用
            8.1 干擾素在人醫(yī)上的應(yīng)用
            8.2 干擾素在畜牧獸醫(yī)上的應(yīng)用
        9 小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
第二篇 試驗(yàn)部分
    第一章 貓α和ω干擾素全基因合成及原核表達(dá)
        1 材料與方法
            1.1 試驗(yàn)用質(zhì)粒與菌株
            1.2 主要試劑與儀器
                1.2.1 表達(dá)重組干擾素相關(guān)試劑
                1.2.2 主要儀器設(shè)備和耗材
            1.3 試驗(yàn)用溶液配制
            1.4 重組干擾素基因的設(shè)計(jì)與合成
            1.5 重組干擾素蛋白的原核表達(dá)
                1.5.1 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌BL21
                1.5.2 質(zhì)粒提取
                1.5.3 重組質(zhì)粒酶切鑒定
                1.5.4 重組質(zhì)粒測序鑒定
                1.5.5 干擾素的誘導(dǎo)表達(dá)及鑒定
                1.5.6 大腸桿菌表達(dá)的貓α和ω干擾素的可溶性鑒定
            1.6 重組干擾素的大量表達(dá)
                1.6.1 菌體破碎及包涵體提取
                1.6.2 包涵體的洗滌及變性
                1.6.3 目的蛋白透析復(fù)性
        2 結(jié)果與分析
            2.1 優(yōu)化后的貓α和ω干擾素基因序列
            2.2 重組菌誘導(dǎo)表達(dá)產(chǎn)物鑒定
            2.3 超聲裂解后上清和包涵體電泳分析
            2.4 重組蛋白純化后SDS-PAGE分析
        3 討論
            3.1 研究意義
            3.2 表達(dá)系統(tǒng)的選擇
            3.3 包涵體的形成及純化
            3.4 蛋白復(fù)性
        參考文獻(xiàn)
    第二章 貓α和ω干擾素抗病毒活性研究
        1 材料與方法
            1.1 試驗(yàn)用細(xì)胞及病毒
            1.2 試劑
            1.3 重組貓α干擾素抗VSV活性測定
                1.3.1 細(xì)胞復(fù)蘇
                1.3.2 水皰性口炎病毒(VSV)的擴(kuò)增與保存
                1.3.3 病毒效價(jià)滴定
                1.3.4 重組貓α干擾素在Vero上抗VSV活性測定
                1.3.5 重組貓α干擾素在F81上抗VSV活性測定
            1.4 重組貓ω干擾素抗VSV活性測定
                1.4.1 水皰性口炎病毒(VSV)的擴(kuò)增與保存
                1.4.2 病毒效價(jià)滴定
                1.4.3 重組貓ω干擾素在Vero上抗VSV活性測定
                1.4.4 重組貓ω干擾素在F81上抗VSV活性測定
        2 結(jié)果與分析
            2.1 VSV的TCID5o測定
                2.1.1 Vero上VSV的增殖與TCID₅₀測定
                2.1.2 F81上VSV的增殖與TCID₅₀測定
            2.2 重組貓α干擾素抗VSV活性測定結(jié)果
                2.2.1 Vero細(xì)胞上α干擾素活性的測定
                2.2.2 F81細(xì)胞上α干擾素活性的測定
            2.3 重組貓ω干擾素抗VSV活性測定結(jié)果
                2.3.1 Vero細(xì)胞上ω干擾素活性的測定
                2.3.2 F81細(xì)胞上ω干擾素活性的測定
        3 討論
            3.1 重組干擾素抗病毒活性的測定
            3.2 重組貓α干擾素生物學(xué)活性測定
            3.3 重組貓ω干擾素生物學(xué)活性測定
        參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
附錄
致謝



本文編號：4001491