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羊口瘡病毒楊凌株和瀘西株的分離鑒定及毒力致弱研究

發(fā)布時(shí)間:2024-06-14 20:05
  羊口瘡,又叫羊傳染性膿皰皮炎,是由羊口瘡病毒引起的綿羊和山羊的急性接觸傳染性的病毒病。羊口瘡在世界范圍內(nèi)流行,常發(fā)生于夏末與秋冬季節(jié),在我國(guó)新疆、青海、云南、山東、四川、陜西等十多個(gè)省份都有相應(yīng)的報(bào)道,給我國(guó)的養(yǎng)羊業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。在流行地區(qū),羊口瘡發(fā)病率高達(dá)80%90%。本文分離鑒定了陜西楊凌和云南瀘西地區(qū)羊口瘡病毒的流行毒株,通過(guò)微量細(xì)胞交叉中和試驗(yàn)鑒定了兩株羊口瘡病毒在中和水平的抗原差異性,同時(shí)將兩株病毒在犢牛睪丸原代細(xì)胞上連續(xù)傳代至第86代,分別把第86代病毒劃痕接種于3只3045日齡的羔羊,檢測(cè)病毒弱化效果。試驗(yàn)結(jié)果如下: 1.羊口瘡病毒楊凌和瀘西野毒株的分離與鑒定 第5代病毒能引起明顯的細(xì)胞病變,其中第5代楊凌株病毒滴度為107.66TCID50/mL,瀘西株病毒滴度為108.2TCID50/mL;楊凌株病毒PCR擴(kuò)增片段與設(shè)計(jì)引物的序列的相似度分別為96.57%和96.43%,瀘西株病毒與設(shè)計(jì)引物的序列相似度分別為97.75%,96.33%,兩株病毒B2L基因擴(kuò)增片段的相似性為96.93%,F(xiàn)1L基因擴(kuò)增片段的相似性為96...

【文章頁(yè)數(shù)】:56 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【部分圖文】:

圖1-1羊口瘡病毒毒力/致病性相關(guān)分子的活性關(guān)系

圖1-1羊口瘡病毒毒力/致病性相關(guān)分子的活性關(guān)系

分子相互作用層面來(lái)解釋病毒的進(jìn)化學(xué)說(shuō)(Lateef2011;Seetetal.2003)(4)dUTPaseCottone等人在研究中將羊口瘡病毒弱毒株D1701的dUTPase基因在細(xì)菌內(nèi)以硫氧還原融合蛋白的形式表達(dá)出來(lái),體外實(shí)驗(yàn)表明,羊口瘡病毒的dUTPa....


圖1-1羊口瘡發(fā)病羊照片A.出血B.結(jié)痂Fig.1-1Photoesoflambinfectedbyorfvirus

圖1-1羊口瘡發(fā)病羊照片A.出血B.結(jié)痂Fig.1-1Photoesoflambinfectedbyorfvirus

醇方法提取第5代病毒液的DNA,參照本實(shí)驗(yàn)室CR檢測(cè)方法(李前瑞等2013)進(jìn)行檢測(cè)。B2L、F11和HQ221964.1的基因序列設(shè)計(jì)。PCR反應(yīng)體、MgCl22μL、ExTaq0.25μL、模板(Template)2μL、引CR反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃預(yù)變性....


圖1-5正常犢牛睪丸原代細(xì)胞(20×)

圖1-5正常犢牛睪丸原代細(xì)胞(20×)

兩株病毒引起的細(xì)胞病變至第5代時(shí),接種的犢牛睪丸原代細(xì)胞產(chǎn)生明顯細(xì)胞病變。病變細(xì)變圓、聚堆等現(xiàn)象,后期犢牛睪丸原代細(xì)胞發(fā)生皺縮、脫落,CPE),而正常對(duì)照的犢牛睪丸原代細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好(圖1-5)。proteinsubstanceinnecrotictissue圖....


圖1-4楊凌分離株接毒72h后發(fā)生細(xì)胞病變的犢牛睪丸原代細(xì)胞(20×)

圖1-4楊凌分離株接毒72h后發(fā)生細(xì)胞病變的犢牛睪丸原代細(xì)胞(20×)

兩株病毒引起的細(xì)胞病變至第5代時(shí),接種的犢牛睪丸原代細(xì)胞產(chǎn)生明顯細(xì)胞病變。病變細(xì)變圓、聚堆等現(xiàn)象,后期犢牛睪丸原代細(xì)胞發(fā)生皺縮、脫落,CPE),而正常對(duì)照的犢牛睪丸原代細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好(圖1-5)。proteinsubstanceinnecrotictissue圖....



本文編號(hào):3994357

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