鵝產(chǎn)蛋時所處的飼養(yǎng)環(huán)境和方式,會在一定程度上影響鵝的產(chǎn)蛋性。同時,卵泡的發(fā)育與激素的水平,也能調(diào)控鵝的產(chǎn)蛋性。而鵝產(chǎn)蛋的數(shù)量被決定的最直接的因素,必然是卵泡的發(fā)育。顆粒細(xì)胞不斷的增殖繼而凋亡,卵泡類的固醇激素,其中含量的變化,均伴隨著卵泡的發(fā)育。脂質(zhì)代謝的調(diào)控因素如下,它由脂肪酸的從頭合成,脂肪酸β氧化與甘油三酯進(jìn)行合成和分解一起構(gòu)成,其中PPARγ在脂質(zhì)代謝中發(fā)揮重要的作用,在脂肪細(xì)胞中高水平表達(dá),具有極強(qiáng)的生脂作用,是調(diào)控脂質(zhì)沉積的重要因子。本試驗(yàn)通過基因克隆獲得PPARγ基因CDS區(qū)序列和啟動子序列,并應(yīng)用實(shí)時熒光定量技術(shù)檢測不同發(fā)育階段卵泡膜層和顆粒層中PPARγ的表達(dá)量,同時在體外培養(yǎng)的鵝顆粒細(xì)胞中分別轉(zhuǎn)染PPARγ的過表達(dá)載體、PPARγ干擾載體,檢測脂質(zhì)代謝、膽固醇合成等相關(guān)途徑的關(guān)鍵基因表達(dá)量變化,以探究PPARγ在鵝卵巢顆粒細(xì)胞脂質(zhì)代謝中的功能。以下是它得到的大體研究成果。(1)克隆獲得鵝PPARγ基因CDS區(qū)序列1428bp,啟動子序列2795bp。鵝PPARγ基因與其他鳥類相似性為第一高,都處于98%以上,符合物種遺傳進(jìn)化規(guī)律;PPARγ啟動子具有4個核心啟動子區(qū)...

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【學(xué)位級別】：碩士

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圖1鵝卵巢總RNA提取后瓊脂糖凝膠電泳圖

鵝卵巢總RNA提取后瓊脂糖凝膠rosegelelectrophoresisoftotalRNAS區(qū)克隆的引物，對鵝PPARγ基因進(jìn)行P增條件下，使用擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行2000bpMarker的參照條帶，目因的bp長度。

圖2鵝PPARγ基因瓊脂糖凝膠電泳圖

巢總RNA提取后瓊脂糖凝膠電elelectrophoresisoftotalRNAin克隆物，對鵝PPARγ基因進(jìn)行P件下，使用擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行100bpMarker的參照條帶，目的bp長度。

圖4PPARγ在不同卵泡膜層和顆粒層中的相對表達(dá)量Fig.4RelativeexpressionlevelsofPPARγmRNAingranulosaandthecaindifferentfollicles

在直徑8～10mm的階段卵泡顆粒層中表達(dá)量出現(xiàn)第一次較為顯F5階段卵泡顆粒層上升到最大值，再逐漸下降。如圖3所示，其中PPAR卵泡顆粒層表達(dá)量顯著高于各階段卵泡顆粒層中的表達(dá)量（P＜0.05），PPF2階段卵泡顆粒層表達(dá)量顯著高于等級前卵泡（P＜0.05）。PPA....

圖5PPARγ在不同培養(yǎng)時間不同顆粒細(xì)胞中表達(dá)Fig.5RelativeexpressionlevelsofPPARγindifferentgranulosaandtime

圖5PPARγ在不同培養(yǎng)時間不同顆粒細(xì)胞中表達(dá)Fig.5RelativeexpressionlevelsofPPARγindifferentgranulosaandtimePPARγ干擾載體轉(zhuǎn)染鵝顆粒細(xì)胞.1轉(zhuǎn)染效果鑒定如圖6所示，將構(gòu)建的PPA....

本文編號：3993446