發(fā)布時(shí)間：2024-06-08 00:35

　　通過(guò)體細(xì)胞核移植技術(shù),卵母細(xì)胞的重編程因子可將高度分化的體細(xì)胞重編程,形成重構(gòu)克隆胚胎,并能發(fā)育成完整的動(dòng)物個(gè)體。卵母細(xì)胞的質(zhì)量和重編程能力是體細(xì)胞克隆技術(shù)最關(guān)鍵的限制因素之一。在體內(nèi)正常發(fā)育過(guò)程中卵母細(xì)胞處于低氧環(huán)境,且卵泡液含有自由基清除劑和抗氧化酶,可保護(hù)卵母細(xì)胞免受氧化損傷。與體內(nèi)成熟的卵母細(xì)胞相比,體外成熟(IVM)卵母細(xì)胞處于一個(gè)相對(duì)高氧的環(huán)境,并且缺乏自由基清除劑和抗氧化酶的保護(hù),因而其活性氧水平較高,從而表現(xiàn)出較低的質(zhì)量和發(fā)育潛力。活性氧的過(guò)量產(chǎn)生會(huì)引起氧化應(yīng)激,破壞細(xì)胞膜并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。褪黑素作為有效的自由基清除劑和廣譜抗氧化劑,可直接清除活性氧并減少細(xì)胞氧化損傷。最近的研究表明,褪黑素存在于卵泡液中,同時(shí)在體外培養(yǎng)過(guò)程中補(bǔ)充褪黑素可提高卵母細(xì)胞的受精能力和發(fā)育能力,在早期胚胎發(fā)育期間補(bǔ)充褪黑素可顯著改善SCNT胚胎的發(fā)育能力。然而,關(guān)于褪黑素如何改善卵母細(xì)胞質(zhì)量和發(fā)育潛力的潛在機(jī)制需要進(jìn)一步研究。另外,IVM期間添加褪黑素對(duì)后續(xù)胚胎發(fā)育的影響仍不清楚。因此,在這項(xiàng)研究中,我們通過(guò)在IVM培養(yǎng)基中補(bǔ)充褪黑素,探究其對(duì)體外牛卵母細(xì)胞質(zhì)量和后續(xù)胚胎發(fā)育能力的影響機(jī)制。以下...

【文章頁(yè)數(shù)】：85 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
主要符號(hào)對(duì)照表
綜述部分
    第一章 卵母細(xì)胞與體細(xì)胞核移植胚胎
        1.1 體細(xì)胞核移植技術(shù)
        1.2 卵母細(xì)胞在克隆胚胎早期發(fā)育過(guò)程中的重要作用
            1.2.1 提供能量的線粒體
            1.2.2 介導(dǎo)減數(shù)分裂的紡錘體
            1.2.3 母源組蛋白及其變體
        1.3 表觀遺傳修飾在克隆胚胎早期發(fā)育過(guò)程中的作用
            1.3.1 組蛋白乙酰化
            1.3.2 組蛋白甲基化
            1.3.3 DNA甲基化
    第二章 褪黑素的功能與作用
        2.1 褪黑素的發(fā)現(xiàn)與生理功能
        2.2 褪黑素在生殖過(guò)程中的作用
試驗(yàn)部分
    第三章 褪黑素對(duì)卵母細(xì)胞體外成熟質(zhì)量及其后續(xù)胚胎發(fā)育的影響
        3.1 材料和試劑
            3.1.1 材料來(lái)源
            3.1.2 儀器設(shè)備
            3.1.3 主要溶液及試劑耗材
        3.2 方法
            3.2.1 卵母細(xì)胞的體外成熟
            3.2.2 卵母細(xì)胞的免疫熒光染色
            3.2.3 卵母細(xì)胞 ROS 水平的測(cè)定
            3.2.4 卵母細(xì)胞早期凋亡的檢測(cè)
            3.2.5 卵母細(xì)胞線粒體活性的檢測(cè)
            3.2.6 體細(xì)胞核移植
            3.2.7 體外受精
            3.2.8 囊胚的免疫熒光染色
            3.2.9 囊胚細(xì)胞的差異染色
            3.2.10 囊胚細(xì)胞的凋亡檢測(cè)
            3.2.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
        3.3 結(jié)果
            3.3.1 褪黑素對(duì)卵母細(xì)胞成熟率的影響
            3.3.2 褪黑素對(duì)牛卵母細(xì)胞 ROS 水平和早期凋亡水平的影響
            3.3.3 褪黑素對(duì)牛卵母細(xì)胞線粒體活性的影響
            3.3.4 褪黑素對(duì)牛卵母細(xì)胞紡錘體形態(tài)的影響
            3.3.5 褪黑素牛卵母細(xì)胞表觀遺傳修飾的影響
            3.3.6 牛卵母細(xì)胞體外成熟過(guò)程中添加褪黑素對(duì)后續(xù)胚胎發(fā)育的影響
            3.3.7 牛卵母細(xì)胞體外成熟過(guò)程中添加褪黑素對(duì)后續(xù)胚胎質(zhì)量的影響
            3.3.8 牛卵母細(xì)胞體外成熟過(guò)程中添加褪黑素對(duì)后續(xù)胚胎表觀修飾的影響
        3.4 討論
        3.5 小結(jié)
    第四章 褪黑素對(duì)體外成熟卵母細(xì)胞基因表達(dá)的影響
        4.1 材料和試劑
            4.1.1 材料來(lái)源
            4.1.2 儀器設(shè)備
            4.1.3 主要溶液及試劑耗材
        4.2 方法
            4.2.1 樣品收集
            4.2.2 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序
            4.2.3 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)過(guò)濾與質(zhì)控
            4.2.4 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)比對(duì)分析
            4.2.5 樣品間數(shù)據(jù)相關(guān)性分析
            4.2.6 差異表達(dá)基因篩選與分析
            4.2.7 差異表達(dá)基因深入挖掘
            4.2.8 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        4.3 結(jié)果
            4.3.1 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序樣品的數(shù)據(jù)過(guò)濾與質(zhì)量評(píng)估
            4.3.2 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)的比對(duì)情況
            4.3.3 基于基因表達(dá)水平的樣品間相關(guān)性分析
            4.3.4 差異表達(dá)基因篩選結(jié)果
            4.3.5 組間差異基因的基因本體功能顯著性富集分析
            4.3.6 組間差異基因的Pathway顯著性富集分析
            4.3.7 差異表達(dá)基因qPCR驗(yàn)證結(jié)果
        4.4 討論
        4.5 小結(jié)
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3991192