發(fā)布時間：2024-06-06 06:27

　　為真核表達雞傳染性支氣管炎病毒(IBV)的S1蛋白并鑒定其免疫原性,構(gòu)建了IBV廣西優(yōu)勢血清型代表株GX-YL5 S1蛋白基因的重組表達載體pFastBac^TM/HBM-TOPO-S1,轉(zhuǎn)化DH10Bac細胞進而拯救出重組桿狀病毒;經(jīng)間接免疫熒光(IFA)和Western blot鑒定并大量表達;純化后免疫新西蘭大白兔制備兔抗血清,應用IFA和Western blot對該重組蛋白的反應原性進行鑒定,并應用氣管環(huán)(TOC)中和試驗分析其免疫原性。IFA顯示重組桿狀病毒感染后72 h細胞出現(xiàn)特異性熒光;Western blot顯示重組蛋白與抗His標簽單克隆抗體以及IBV特異性抗體均能結(jié)合,且反應性良好,特異性強;中和試驗顯示制備的血清對IBV的中和滴度為1∶512。表明該重組S1蛋白具有較好的免疫原性,為IBV S1蛋白的生物學功能、基因工程亞單位疫苗等研究奠定了基礎。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 載體、細胞、毒株和實驗動物
        1.1.2 主要試劑
        1.1.3 主要儀器
    1.2 方法
        1.2.1 引物設計
        1.2.2 S1基因的克隆及重組表達載體的構(gòu)建
        1.2.3 重組桿狀病毒的產(chǎn)生
        1.2.4 重組蛋白的IFA鑒定
        1.2.5 重組蛋白的Western blot鑒定
        1.2.6 重組S1蛋白的大量表達及純化
        1.2.7 重組S1蛋白免疫動物
        1.2.8 IFA驗證多抗血清與重組蛋白的反應性
        1.2.9 Western blot驗證多抗血清與重組蛋白的反應性
        1.2.10 多抗血清的中和試驗
2 結(jié)果
    2.1 S1基因的RT-PCR鑒定
    2.2 重組表達載體的鑒定
    2.3 重組桿粒的PCR鑒定
    2.4 重組蛋白的IFA鑒定
    2.5 重組蛋白的Western blot鑒定
    2.6 重組S1蛋白的純化結(jié)果
    2.7 多抗血清的IFA鑒定
    2.8 多抗血清的Western blot鑒定
    2.9 中和試驗結(jié)果
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