發(fā)布時(shí)間：2024-06-06 03:40

　　新城疫(ND)是一種高致病的禽類惡性傳染病。由于其高發(fā)病率和高死亡率對(duì)社會(huì)生產(chǎn)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。而近些年,隨著反向遺傳學(xué)操作系統(tǒng)的發(fā)展,其為系統(tǒng)的操作和研究RNA病毒提供了操作平臺(tái),該方法可以重新設(shè)計(jì)和優(yōu)化病毒的基因組,還可以研發(fā)新的突變體和重組病毒疫苗。NDV的反向遺傳操作平臺(tái)為研究其生物學(xué)特點(diǎn)具有重大意義,而其復(fù)制必須同時(shí)共轉(zhuǎn)染多個(gè)輔助質(zhì)粒,并在T7 RNA聚合酶調(diào)控下轉(zhuǎn)錄、翻譯后形成RNP核糖核蛋白復(fù)合體,包裹病毒全基因組,從而開始病毒復(fù)制程序。本實(shí)驗(yàn)以BL-21大腸桿菌為模板應(yīng)用PT-PCR方法獲得T7基因,之后通過分子生物學(xué)方法構(gòu)建了穩(wěn)定表達(dá)T7 RNA聚合酶的重組痘苗病毒,用于提供T7 RNA聚合酶;構(gòu)建了輔助質(zhì)粒pCI-L、pCI-NP和pCI-P三個(gè)輔助質(zhì)粒形成RNP復(fù)合體;應(yīng)用SOE-PCR(重疊延伸PCR)方法基礎(chǔ)上構(gòu)建了4961bp的基因組起始基因片段ND1,由于ND1片段較大,所以自制T載體pCI-T,成功克隆了ND1片段;構(gòu)建了轉(zhuǎn)移質(zhì)粒pBSK-0-1-2-3以及真核表達(dá)質(zhì)粒pBR322-ND5。完成了新城疫JL02/2000株反向遺傳輔助系統(tǒng)的建立以及基因組...

【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

P基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物.1.1ThePCRamplificationsofgeneofNPandP.1.NP2.DL2000maker3.P圖1.2NP，P基因酶切結(jié)果Fig.1.2TheenzymeresultsofgenofNP....

P基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物.1.1ThePCRamplificationsofgeneofNPandP.1.NP2.DL2000maker3.P圖1.2NP，P基因酶切結(jié)果Fig.1.2TheenzymeresultsofgenofNP....

、P、L1和L2基因PCR擴(kuò)增結(jié)果見圖1.1、圖1.3和圖1.4。輔助質(zhì)粒圖1.3L1基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物Fig.1.3ThePCRamplificationsofgeneofL1.1.λ-EcoT14IdigestDNAmaker2....

、P、L1和L2基因PCR擴(kuò)增結(jié)果見圖1.1、圖1.3和圖1.4。輔助質(zhì)粒圖1.3L1基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物Fig.1.3ThePCRamplificationsofgeneofL1.1.λ-EcoT14IdigestDNAmaker2....

本文編號(hào)：3990252