發(fā)布時(shí)間：2024-06-04 19:14

　　為快速檢測(cè)豬圓環(huán)病毒3型(PCV3),根據(jù)PCV3全基因組保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物,建立PCV3套式PCR檢測(cè)方法,并對(duì)采自安徽省部分地區(qū)的528份豬臨床樣品進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示,建立的方法僅對(duì)PCV3檢測(cè)陽(yáng)性,最低檢測(cè)限為1.74×10拷貝/μL,與商品化檢測(cè)試劑盒的符合率高;臨床樣品中PCV3總陽(yáng)性檢出率為20.45%(108/528)。建立的PCV3套式PCR方法可用于PCV3的臨床樣品檢測(cè)。

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【部分圖文】：

圖2不同退火溫度擴(kuò)增結(jié)果

圖1重組質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品擴(kuò)增結(jié)果2.3特異性試驗(yàn)

圖4PCV3套式PCR特異性擴(kuò)增的結(jié)果

圖3一擴(kuò)模板不同稀釋度進(jìn)行二擴(kuò)的擴(kuò)增結(jié)果2.5重復(fù)性試驗(yàn)

圖1重組質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品擴(kuò)增結(jié)果

對(duì)套式PCR退火溫度及二擴(kuò)模板稀釋比例進(jìn)行篩選及優(yōu)化,結(jié)果顯示,當(dāng)退火溫度為58℃時(shí)擴(kuò)增條帶最清晰(圖2),表明58℃為本方法的最佳退火溫度;二擴(kuò)模板進(jìn)行50倍稀釋時(shí)擴(kuò)增出的條帶最清晰且無(wú)雜帶(圖3),表明50倍為最佳稀釋倍數(shù)。圖2不同退火溫度擴(kuò)增結(jié)果

圖3一擴(kuò)模板不同稀釋度進(jìn)行二擴(kuò)的擴(kuò)增結(jié)果

將PCV3陽(yáng)性重組質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品按照10-1～10-10稀釋成1.74×109拷貝/μL～1.74×100拷貝/μL共10個(gè)系列,作為模板進(jìn)行套式PCR與普通PCR的靈敏度試驗(yàn),結(jié)果如圖5。圖5A為套式PCR擴(kuò)增結(jié)果,能夠擴(kuò)增出PCV3標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒的最大稀釋度為10-9,即最低檢測(cè)限為....

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