細(xì)胞穿膜肽TAT介導(dǎo)豬繁殖與呼吸綜合征病毒Nsp9納米抗體Nb6抗病毒感染的研究
發(fā)布時(shí)間：2020-12-03 22:08
豬繁殖與呼吸綜合癥（PRRS）是一種以豬繁殖障礙和呼吸疾病為特征的病毒性傳染病,是目前造成全球養(yǎng)豬業(yè)巨大經(jīng)濟(jì)損失的重要傳染病之一。該病由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起。PRRSV以高變性、免疫抑制、持續(xù)性感染及抗體依賴性增強(qiáng)為特征,現(xiàn)有疫苗的群體保護(hù)力較低,尚無(wú)有效的抗病毒藥物。PRRSV非結(jié)構(gòu)蛋白Nsp9是RNA依賴的RNA聚合酶,在不同毒株間高度保守,被認(rèn)為是抗PRRSV藥物的一個(gè)重要靶標(biāo)。在先前的研究中,本實(shí)驗(yàn)室成功制備出一株P(guān)RRSV Nsp9特異性納米抗體Nb6,并且證明細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的Nb6可以顯著抑制PRRSV在MARC-145細(xì)胞中的復(fù)制。然而,由于納米抗體不能有效穿過(guò)細(xì)胞膜,因此不能進(jìn)入細(xì)胞達(dá)到抗病毒的作用。因此,制備安全、有效和無(wú)細(xì)胞毒性的細(xì)胞內(nèi)遞送系統(tǒng)對(duì)于提高Nb6的抗病毒活性至關(guān)重要。細(xì)胞穿透肽（cell penetrating peptides,CPPs）是一類含有約5-30個(gè)氨基酸的短肽,可以通過(guò)直接易位或內(nèi)吞作用等方式進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),且不會(huì)引起細(xì)胞毒性。目前,CPPs已經(jīng)被用作向細(xì)胞內(nèi)遞送各種貨物的工具,例如質(zhì)粒DNA,siRNA,蛋白質(zhì),病毒,成像劑和...
【文章來(lái)源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】：106 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【部分圖文】：
PRRSV結(jié)構(gòu)圖（引自(Dokland,2010;MusicandGagnon,2010)）
第一章 文獻(xiàn)綜述1996)，Nsp10 是含有鋅指基序的解旋酶(Bautista et al., 2002; Seybert et al., 2005; Seybertet al., 2000)，Nsp11 是鳥苷酸特異性核酸內(nèi)切酶(Nedialkova et al., 2009)。目前對(duì)于 pp1ab中其它非結(jié)構(gòu)蛋白（Nsp5-8、Nsp12）的功能及結(jié)構(gòu)都尚不清楚，還需進(jìn)一步的研究。PRRSV 非結(jié)構(gòu)蛋白 Nsp9 與宿主細(xì)胞蛋白共同組裝成病毒復(fù)制轉(zhuǎn)錄復(fù)合體（replicationand transcription complex, RTC），參與病毒 RNA 的復(fù)制及亞基因組 mRNA 的轉(zhuǎn)錄與翻譯。同時(shí)，Nan 等人發(fā)現(xiàn) PRRSV其它非結(jié)構(gòu)蛋白與 Nsp9 之間發(fā)生互作，形成了復(fù)雜的互作網(wǎng)絡(luò)(Nan et al., 2018)，這可能為 RTC 形成和功能的研究提供了理論基礎(chǔ)。
人發(fā)現(xiàn)了一種由 Gp5 的亞基因組 mRNA 編碼的膜錨定蛋白，并證實(shí)該 Gp5a 蛋白作為次要結(jié)構(gòu)蛋白被組裝到病毒顆粒中，并且在 PRRSV復(fù)制中至關(guān)重要(Firth et al., 2011;Johnson et al., 2011; Sun et al., 2013)。此外，Kappes 等人研究發(fā)現(xiàn)非結(jié)構(gòu)蛋白 Nsp2 能夠組裝到多種PRRSV毒株的病毒顆粒中，但其在病毒粒子中的作用尚不清楚(Kappes etal., 2013)。1.1.3 PRRSV 感染與機(jī)體免疫應(yīng)答1.1.3.1 PRRSV 感染相關(guān)的受體蛋白豬是 PRRSV目前已知的唯一天然宿主，并且 PRRSV感染嚴(yán)格靶向于單核巨噬細(xì)胞。PRRSV通過(guò)網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞，內(nèi)體酸化膜融合之后，病毒基因組被釋放到細(xì)胞質(zhì)中，然后開始它的復(fù)制。研究表明，PRRSV進(jìn)入細(xì)胞由許多宿主細(xì)胞受體或因子介導(dǎo)，包括硫酸乙酰肝素(Delputte et al., 2002)、波形蛋白(Kim et al., 2006)、CD151(Wu et al., 2014)、豬 CD163(Guo et al., 2014)、唾液酸黏附蛋白（CD169）(Delputteet al., 2007)、DC-SIGN（CD209）(Huang et al., 2009; Pineyro et al., 2016)和 M YH9(Gao etal., 2016)等（圖 1-3）。通過(guò)對(duì)豬巨噬細(xì)胞 cDNA 文庫(kù)受體功能的篩選，發(fā)現(xiàn) CD163（清道夫受體半胱氨酸家族成員）是 PRRSV起始感染的關(guān)鍵因素。一些 PRRSV非易感細(xì)
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Porcine reproductive and respiratory syndrome virus vaccines: Immunogenicity, efficacy and safety aspects[J]. Wasin Charerntantanakul. World Journal of Virology. 2012(01)
本文編號(hào)：2896569
【文章來(lái)源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】：106 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【部分圖文】：
PRRSV結(jié)構(gòu)圖（引自(Dokland,2010;MusicandGagnon,2010)）
第一章 文獻(xiàn)綜述1996)，Nsp10 是含有鋅指基序的解旋酶(Bautista et al., 2002; Seybert et al., 2005; Seybertet al., 2000)，Nsp11 是鳥苷酸特異性核酸內(nèi)切酶(Nedialkova et al., 2009)。目前對(duì)于 pp1ab中其它非結(jié)構(gòu)蛋白（Nsp5-8、Nsp12）的功能及結(jié)構(gòu)都尚不清楚，還需進(jìn)一步的研究。PRRSV 非結(jié)構(gòu)蛋白 Nsp9 與宿主細(xì)胞蛋白共同組裝成病毒復(fù)制轉(zhuǎn)錄復(fù)合體（replicationand transcription complex, RTC），參與病毒 RNA 的復(fù)制及亞基因組 mRNA 的轉(zhuǎn)錄與翻譯。同時(shí)，Nan 等人發(fā)現(xiàn) PRRSV其它非結(jié)構(gòu)蛋白與 Nsp9 之間發(fā)生互作，形成了復(fù)雜的互作網(wǎng)絡(luò)(Nan et al., 2018)，這可能為 RTC 形成和功能的研究提供了理論基礎(chǔ)。
人發(fā)現(xiàn)了一種由 Gp5 的亞基因組 mRNA 編碼的膜錨定蛋白，并證實(shí)該 Gp5a 蛋白作為次要結(jié)構(gòu)蛋白被組裝到病毒顆粒中，并且在 PRRSV復(fù)制中至關(guān)重要(Firth et al., 2011;Johnson et al., 2011; Sun et al., 2013)。此外，Kappes 等人研究發(fā)現(xiàn)非結(jié)構(gòu)蛋白 Nsp2 能夠組裝到多種PRRSV毒株的病毒顆粒中，但其在病毒粒子中的作用尚不清楚(Kappes etal., 2013)。1.1.3 PRRSV 感染與機(jī)體免疫應(yīng)答1.1.3.1 PRRSV 感染相關(guān)的受體蛋白豬是 PRRSV目前已知的唯一天然宿主，并且 PRRSV感染嚴(yán)格靶向于單核巨噬細(xì)胞。PRRSV通過(guò)網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞，內(nèi)體酸化膜融合之后，病毒基因組被釋放到細(xì)胞質(zhì)中，然后開始它的復(fù)制。研究表明，PRRSV進(jìn)入細(xì)胞由許多宿主細(xì)胞受體或因子介導(dǎo)，包括硫酸乙酰肝素(Delputte et al., 2002)、波形蛋白(Kim et al., 2006)、CD151(Wu et al., 2014)、豬 CD163(Guo et al., 2014)、唾液酸黏附蛋白（CD169）(Delputteet al., 2007)、DC-SIGN（CD209）(Huang et al., 2009; Pineyro et al., 2016)和 M YH9(Gao etal., 2016)等（圖 1-3）。通過(guò)對(duì)豬巨噬細(xì)胞 cDNA 文庫(kù)受體功能的篩選，發(fā)現(xiàn) CD163（清道夫受體半胱氨酸家族成員）是 PRRSV起始感染的關(guān)鍵因素。一些 PRRSV非易感細(xì)
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Porcine reproductive and respiratory syndrome virus vaccines: Immunogenicity, efficacy and safety aspects[J]. Wasin Charerntantanakul. World Journal of Virology. 2012(01)
本文編號(hào)：2896569
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