發(fā)布時(shí)間：2020-11-12 05:18

　　 在病毒疫苗的生產(chǎn)過程中,常利用生物反應(yīng)器大規(guī)模培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞用于病毒繁殖。目前國內(nèi)細(xì)胞株開發(fā)水平落后于國外,這阻礙了新疫苗品種的開發(fā)和疫苗生產(chǎn)效率的提高。本論文針對動(dòng)物疫苗生產(chǎn)細(xì)胞株開發(fā)中的兩個(gè)關(guān)鍵問題:細(xì)胞懸浮培養(yǎng)和細(xì)胞對病毒的廣譜性。利用RNA-Seq、siRNA和基因過表達(dá)載體構(gòu)建等技術(shù),一方面探索影響細(xì)胞懸浮生長的關(guān)鍵基因,另一方面拓展細(xì)胞的廣譜性,解決細(xì)胞對部分病毒不敏感的問題,為將來構(gòu)建新型全懸浮廣譜疫苗生產(chǎn)細(xì)胞株打下基礎(chǔ)。主要研究成果如下:(1)通過對BHK-21和CHO-K1細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組分析,篩選出18個(gè)貼壁和懸浮細(xì)胞之間的顯著差異基因,發(fā)現(xiàn)其主要與基因轉(zhuǎn)錄和翻譯相關(guān)。使用GeneMANIA構(gòu)建生物網(wǎng)絡(luò)確定了18個(gè)基因中最關(guān)鍵的基因PABPC1,并發(fā)現(xiàn)抑制PABPC1的表達(dá)能夠促進(jìn)BHK-21細(xì)胞的懸浮生長。(2)構(gòu)建了犬瘟熱病毒受體NECTIN4的真核表達(dá)載體并轉(zhuǎn)化牛腎細(xì)胞MDBK,獲得穩(wěn)定表達(dá)NECTIN4蛋白的細(xì)胞株。發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)入病毒受體基因并表達(dá)有利于相應(yīng)病毒感染,能夠拓展細(xì)胞對病毒的廣譜性。
【學(xué)位單位】：江南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S852.52
【部分圖文】：

1-1 NECTIN4 蛋白結(jié)構(gòu)示意he structural representation of 入侵方式：細(xì)胞內(nèi)吞、細(xì)又可細(xì)分為三個(gè)亞型：網(wǎng)介導(dǎo)的內(nèi)吞。從表 1-1 中細(xì)胞選擇最有效的方式，的受體。白有很多，比如免疫相關(guān)的TCP，細(xì)胞生長和粘附相關(guān)照巴爾的摩分類法分類后的病毒后，例如逆轉(zhuǎn)錄病株細(xì)胞能夠同時(shí)表達(dá)粘附共 6 個(gè)受體，那么這株細(xì)細(xì)胞株開發(fā)所需的費(fèi)用，

江南大學(xué)碩士學(xué)位論文別將同源細(xì)胞中的 DEGs 和 Sus_muts 二者取交集，得到兩個(gè)新集合 BHKkeys（圖 3-1C）代表在同源細(xì)胞間存在顯著表達(dá)差異同時(shí)在懸浮細(xì)胞中發(fā)基因，將二者取交集，得到 27 個(gè)基因，得到集合 Keygenes，剔除在兩組因表達(dá)變化方向不一致的基因，得到 18 個(gè)基因（圖 3-1D）。

江南大學(xué)碩士學(xué)位論文整個(gè)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中，基因間共有基因相互作用（Genetic interactions）、蛋calization）、基因共表達(dá)（Co-expression）三種關(guān)系，統(tǒng)計(jì)三種關(guān)系共涉到表 3-5，可以看出，PABPC1 與 17 個(gè)基因中的 9 個(gè)有相互作用，排認(rèn)為 PABPC1 是最有可能在細(xì)胞懸浮生長過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用的基因
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本文編號：2880302