本文選題：雌激素　切入點(diǎn)：C型鈉肽　出處：《西北農(nóng)林科技大學(xué)》2016年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞減數(shù)分裂在胎兒時(shí)期的原始卵泡內(nèi)就已經(jīng)啟動(dòng),隨后阻滯在第一次減數(shù)分裂前期的雙線期,被阻滯在雙線期的初級(jí)卵母細(xì)胞的細(xì)胞核結(jié)構(gòu)形成生發(fā)泡(germinal vesicle,GV),所以這一時(shí)期的卵母細(xì)胞也稱(chēng)為生發(fā)泡期卵母細(xì)胞。C型鈉肽(C-type natriuretic peptide,CNP)為鈉尿肽家族成員之一。最近的研究發(fā)現(xiàn),CNP是小鼠卵泡中天然存在的、能夠維持卵母細(xì)胞減數(shù)分裂阻滯的關(guān)鍵物質(zhì),由壁顆粒細(xì)胞生成,而其受體NPR2(natriuretic peptide receptor 2,NPR2)由卵丘細(xì)胞產(chǎn)生。研究表明,卵母細(xì)胞旁分泌因子(oocyte-derived paracrine factors,ODPFs)、17β-雌二醇(17β-estradiol,17β-E2)、促卵泡素(follicle-stimulating hormone,FSH)和促黃體素(luteinizing hormone,LH)分別通過(guò)調(diào)控CNP或NPR2的表達(dá)而參與卵母細(xì)胞減數(shù)分裂阻滯。本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn),在卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)液中,添加不同濃度(0.27ng/mL、1.35 ng/mL、13.5ng/mL、1μg/mL和2μg/mL)的雌激素(17β-E2)對(duì)CNP介導(dǎo)的山羊卵母細(xì)胞減數(shù)分裂阻滯的作用表現(xiàn)不同,我們推測(cè)這可能是由于不同濃度雌激素通過(guò)不同的雌激素受體通路發(fā)揮調(diào)控作用。研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下:1.利用Hochest33342染色方法觀察體外培養(yǎng)6 h時(shí),統(tǒng)計(jì)不同雌激素濃度組GV期卵母細(xì)胞百分率,分析不同濃度雌激素對(duì)CNP誘導(dǎo)的山羊卵母細(xì)胞細(xì)胞減數(shù)分裂阻滯的影響。結(jié)果表明,低濃度雌激素促進(jìn)了CNP對(duì)山羊卵母細(xì)胞減數(shù)分裂阻滯的維持作用;而高濃度雌激素則降低了CNP對(duì)山羊卵母細(xì)胞減數(shù)分裂阻滯的維持作用,促進(jìn)了卵母細(xì)胞的核成熟。2.在上述試驗(yàn)基礎(chǔ)上,利用不同雌激素受體的抑制劑或激活劑來(lái)探討高濃度或低濃度雌激素通過(guò)何種受體通路介導(dǎo)CNP誘導(dǎo)的山羊卵母細(xì)胞減數(shù)分裂阻滯。高濃度雌激素(1μg/mL17β-E2)試驗(yàn)結(jié)果表明,雌激素膜受體抑制劑G15的添加使培養(yǎng)后GV期卵母細(xì)胞比率顯著升高,與單獨(dú)添加CNP組無(wú)顯著差異(P0.05);而雌激素核受體抑制劑ICI182780的添加并沒(méi)有影響高濃度雌激素的作用;膜受體激活劑G1的添加,證明了高濃度雌激素通過(guò)膜受體GPR30降低了CNP對(duì)卵母細(xì)胞減數(shù)分裂阻滯的維持作用。低濃度雌激素(0.27 ng/mL17β-E2)試驗(yàn)結(jié)果表明,G15的添加并沒(méi)有阻斷低濃度雌激素對(duì)CNP誘導(dǎo)的山羊卵母細(xì)胞減數(shù)分裂阻滯維持作用的升高,而ICI182780卻阻斷了雌激素的這種作用。證明,低濃度雌激素通過(guò)核受體ERα、ERβ促進(jìn)CNP對(duì)山羊卵母細(xì)胞減數(shù)分裂阻滯的維持作用。3.高濃度或低濃度雌激素對(duì)CNP介導(dǎo)的卵母細(xì)胞減數(shù)分裂阻滯的作用有可能是通過(guò)調(diào)控Npr2 mRNA的表達(dá)而發(fā)揮作用的。COCs體外培養(yǎng)2 h時(shí),高濃度雌激素降低了COCs中Npr2 mRNA的表達(dá)水平,而低濃度雌激素升高了Npr2 mRNA的表達(dá)水平;培養(yǎng)4 h和6 h時(shí),與同時(shí)間段僅添加CNP的對(duì)照組相比,高濃度或低濃度雌激素都升高了Npr2 mRNA的表達(dá)水平。但是無(wú)論是高濃度還是低濃度雌激素的添加,隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),對(duì)Npr2 mRNA表達(dá)的上調(diào)作用都是減弱的;培養(yǎng)4 h和6 h時(shí),由于低濃度雌激素的添加,能夠維持Npr2 mRNA表達(dá)在一個(gè)較高水平,而且與培養(yǎng)2 h時(shí)CNP組無(wú)顯著差異(P0.05),說(shuō)明低濃度雌激素可以在一定時(shí)間內(nèi)維持體外培養(yǎng)的COCs中Npr2mRNA的表達(dá)。4.利用不同的雌激素受體抑制劑或激活劑,進(jìn)一步探討COCs培養(yǎng)2 h時(shí)高濃度雌激素對(duì)Npr2 mRNA表達(dá)的調(diào)控。結(jié)果表明,G15阻礙了高濃度雌激素對(duì)Npr2 mRNA的下調(diào)作用,而ICI182780并不表現(xiàn)此作用;G1的添加起到了與高濃度雌激素添加類(lèi)似的、下調(diào)Npr2 mRNA表達(dá)的作用,進(jìn)一步證明高濃度雌激素通過(guò)GPR30下調(diào)Npr2m RNA表達(dá)。5.將山羊COCs分別在添加CNP、CNP+E2(0.27 ng/mL)和CNP+E2(1μg/mL)的體外成熟培養(yǎng)液中培養(yǎng)6 h,后轉(zhuǎn)入常規(guī)成熟培養(yǎng)液培養(yǎng)18 h,統(tǒng)計(jì)卵丘細(xì)胞擴(kuò)展和卵母細(xì)胞成熟情況。結(jié)果表明,CNP組和CNP+E2(0.27 ng/mL)組卵母細(xì)胞成熟率分別為70.00±5.93%和73.73±6.28%(P0.05);CNP+E2(1μg/mL)組為52.83±8.11%,顯著低于CNP組和CNP+E2(0.27 ng/mL)組(P0.05)。兩步法體外成熟培養(yǎng)山羊COCs后,卵丘細(xì)胞出現(xiàn)了不同程度的擴(kuò)展,三個(gè)培養(yǎng)組卵丘細(xì)胞0級(jí)、Ⅰ級(jí)和Ⅲ級(jí)擴(kuò)展的COCs比例差異不顯著(P0.05);CNP和CNP+E2(0.27 ng/mL)組卵丘細(xì)胞Ⅱ級(jí)擴(kuò)展的數(shù)目顯著高于CNP+E2(1μg/mL)組(P0.05),而Ⅳ級(jí)擴(kuò)展比例則為CNP+E2(1μg/mL)組顯著高于CNP組和CNP+E2(0.27 ng/mL)組(P0.05)。綜上所述,卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)液中雌激素濃度對(duì)CNP誘導(dǎo)的山羊卵母細(xì)胞減數(shù)分裂阻滯的作用不同。高濃度雌激素通過(guò)膜受體GPR30降低了CNP對(duì)山羊卵母細(xì)胞減數(shù)分裂阻滯的維持作用;而低濃度雌激素通過(guò)核受體ERα、ERβ促進(jìn)了CNP對(duì)山羊卵母細(xì)胞減數(shù)分裂阻滯的維持作用。高濃度雌激素對(duì)CNP介導(dǎo)的山羊卵母細(xì)胞減數(shù)分裂阻滯作用的減弱,是通過(guò)膜受體GPR30通路下調(diào)Npr2 mRNA表達(dá)來(lái)發(fā)揮作用的;而低濃度雌激素對(duì)CNP介導(dǎo)的山羊卵母細(xì)胞減數(shù)分裂阻滯作用的促進(jìn),是通過(guò)上調(diào)Npr2mRNA的表達(dá)來(lái)發(fā)揮作用的。兩步法體外培養(yǎng)山羊COCs成熟后,高濃度雌激素顯著促進(jìn)了卵丘細(xì)胞的擴(kuò)散,但是卻降低了卵母細(xì)胞成熟率。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S827

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本文編號(hào)：1601701