發(fā)布時(shí)間：2018-03-10 21:54

  本文選題：桔青毒素　切入點(diǎn)：指數(shù)富集適體系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)　出處：《菌物學(xué)報(bào)》2016年02期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：桔青毒素(citrinin,CTN)是以玉米、谷物、奶酪等為主要成分的食品和動(dòng)物飼料中常見的、由桔青霉菌產(chǎn)生的酮類真菌毒素,可引起人和動(dòng)物的慢性中毒或癌癥,一直缺少靈敏的快速檢測(cè)方法。本文通過指數(shù)富集適體系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)(簡稱SELEX)對(duì)可能與CTN結(jié)合的特異性適體進(jìn)行了篩選,經(jīng)過15輪循環(huán),得到17條適體。通過二級(jí)結(jié)構(gòu)分析、親和力檢測(cè)發(fā)現(xiàn)適體13(Apt-13)對(duì)CTN有較好的親和度,解離常數(shù)Kd為0.06μmol/L。進(jìn)一步利用非熒光標(biāo)記染料Pico Green,利用其與雙鏈DNA結(jié)合的原理,建立了桔青毒素非標(biāo)記熒光檢測(cè)方法,30min完成檢測(cè),最低檢測(cè)限達(dá)到國家標(biāo)準(zhǔn)(50ppb)且與其他毒素?zé)o交叉反應(yīng)。本研究建立的基于適體的桔青毒素檢測(cè)技術(shù)成本低,可以替代傳統(tǒng)的基于抗體的檢測(cè)方法,為霉菌毒素的精準(zhǔn)檢測(cè)技術(shù)的開發(fā)提供了實(shí)驗(yàn)證據(jù)。
[Abstract]:Citrinin (CTN) is a common form of food and animal feed made up of corn, grain, cheese, etc. Ketone mycotoxins produced by Penicillium citri can cause chronic poisoning or cancer in humans and animals. There has been a lack of sensitive and rapid detection methods. In this paper, the specific aptamers that may bind to CTN were screened by exponential enrichment aptamer phylogenetic technique (Selex). After 15 cycles, 17 aptamers were obtained. The affinity test showed that aptamer 13apt-13) had good affinity to CTN, and the dissociation constant KD was 0.06 渭 mol / L. further using the principle of non-fluorescent labeling dye Pico Greenand combining with double-stranded DNA, a non-fluorescent detection method for citrinin was established in 30 minutes. The minimum detection limit is up to the national standard of 50 ppb) and there is no cross reaction with other toxins. The technology based on aptamer is low in cost and can replace the traditional antibody based detection method. It provides experimental evidence for the development of precise detection technology of mycotoxins.
【作者單位】： 浙江農(nóng)林大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院;
【基金】：國家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(863計(jì)劃)(2012AA101602) 浙江省科學(xué)技術(shù)廳重大科技專項(xiàng)重大農(nóng)業(yè)項(xiàng)目(2014C02003) 浙江農(nóng)林大學(xué)人才項(xiàng)目(2011FR025;2012FR047;2013FR012;2013FR054)~~
【分類號(hào)】：TS207.5;S859.8

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1595228