三葉青又叫蛇附子，為蔓生藤本植物。三葉青是一種用途非常廣泛的中草藥。藥理研究表明具有解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎、抗病毒、保肝、增強(qiáng)免疫、抗腫瘤等作用。

　　三葉青化學(xué)成分非常復(fù)雜，已經(jīng)鑒定出的化學(xué)成分有黃酮、黃酮苷、淀粉、還原糖、甾類化合物、氨基酸等 關(guān)于三葉青的針劑提取物，目前研究發(fā)現(xiàn)含有淀粉、還原糖、黃酮、黃酮苷、甾體類化合物和氨基酸等 其中重要的生理活性物質(zhì)有黃酮類、黃酮苷類、甾類 由于三葉青的作用非常廣泛，具有很強(qiáng)的藥用價(jià)值，因此，國(guó)內(nèi)對(duì)三葉青有效成分的分析研究一直沒(méi)有停止 筆者對(duì)三葉青中有效成分提取方法進(jìn)行研究，篩選出萃取效果較好的有機(jī)溶劑分別是乙酸乙酯、乙醚與甲醇

　　1儀器與材料

　　1．1 儀器島津SPD一20A液相色譜儀；島津LCMS一2020液質(zhì)聯(lián)用質(zhì)譜儀；Agilent6890N氣相色譜儀(氫氣發(fā)生器：CYH一500，進(jìn)樣器：Agilent7683B，色譜柱：HP一5，30m×3201xm×0．25Ixm)；電子天平；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

　　1．2 試劑三葉青塊根(產(chǎn)自于浙江麗水，計(jì)1．25kg，粉碎后過(guò)100目篩)；乙醚、石油醚、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、丙酮、甲醇均為分析純。

　　2 方法與結(jié)果

　　2．1 回流提取取粉狀三葉青150g，平均分成3份，分別加入220rnL蒸餾水，浸泡3d。在6O 下恒溫回流提取3d，提取完后的藥材呈現(xiàn)棕褐色，漿狀 用4層紗布過(guò)濾，得濾液約200mI ，棕黃色，備用

　　2．1．1 有機(jī)萃取：收集濾液，在6O 下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，減壓蒸干后得到2．46g浸膏，呈棕褐色，黏著狀 將浸膏過(guò)硅膠柱，按照極性從小到大，用有機(jī)溶劑沖洗。發(fā)現(xiàn)浸膏基本不溶于極性小的溶劑。最后用甲醇沖洗，部分溶于甲醇，出現(xiàn)紅色物質(zhì)，經(jīng)稱量?jī)H為0．16g。

　　2．1．2甲醇萃取物檢測(cè)：對(duì)用甲醇萃取的收集的紅色物質(zhì)進(jìn)行高效液相色譜檢測(cè)，峰號(hào)5、7、8的物質(zhì)含量分別是10．9396、20．0557、23．0946，占比達(dá)到54．O9％ 。

　　2．2 煎煮提取取500g三葉青，加入800g蒸餾水，浸泡3d。

　　將藥液分成2份，在IO0~C下，攪拌煎煮3d，煎煮后的藥液呈糊狀 將糊狀提取物倒入2000mL大燒杯中，加入500mL蒸餾水靜置1天1夜。之后用四層紗布過(guò)濾 兩批濾液合并．在60℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，得到1L濃縮液，呈棕黃色．將濃縮液繼續(xù)過(guò)濾1次，析出部分大分子物質(zhì)，如糖類、淀粉等。

　　2．2．1 有機(jī)溶劑梯度萃�。河糜谳腿�濾液的有機(jī)溶劑根據(jù)極性大小為：乙醚<石油醚<二氯甲烷<乙酸乙酯<氯仿<丙酮<甲醇。按極性從小到大逐次進(jìn)行萃取 用不同配比配置展開劑，展開劑為氯仿一甲醇 比例為10：1，9：1，7：1，5：l，3：1，1：1 在不同比例下，取濾液點(diǎn)板，放在紫外檢測(cè)器下檢測(cè)。

　　最后得到在3：1的展開劑比例下，乙酸乙酯、乙醚、丙酮、甲醇的分離效果比較好 然后將萃取物分別進(jìn)行液相色譜與氣相色譜分析。

　　2．2．2 有機(jī)溶劑萃取物液相和氣相色譜檢測(cè)

　　2．2．3 甲醇萃取物液質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)：因甲醇萃取后的分離效果較好，故用液質(zhì)聯(lián)用(LC／MS)檢測(cè)，其中有4個(gè)最大的峰(見圖1～5)。甲醇萃取物經(jīng)過(guò)質(zhì)譜檢測(cè)后，又用核磁做定量分析，計(jì)算出4個(gè)主要峰的相對(duì)分子質(zhì)量為：644．70、579．50、691．70、648．65。

　　3 討論分析

　　3．1 回流提取 回流提取效果并不很好，用有機(jī)溶劑萃取時(shí)基本得不到浸膏。可能的原因：① 三葉青中的有效成分未被有效煎煮出來(lái)；② 三葉青有效成分主要是黃酮類、甾體類與氨基酸等，是親脂性物質(zhì)，難溶于極性小的溶劑；③依舊有部分溶解于水的有效成分，只是量很少，不易用水提取出來(lái)；④ 可能與其他成分形成了助溶現(xiàn)象，于是無(wú)法提取完全。

　　3．2 液相檢測(cè) 乙酸乙酯分析中，11號(hào)峰的含量最高，占48．3025％ ；乙醚分析中，除7、9號(hào)峰略高，其余各成分含量較多；丙酮中8號(hào)峰含量最高，占41．6450％，其余含量與乙醚相似，含量也較多；甲醇分析中除了3、7、9號(hào)含量為28．5137％ 、25．6087％ 和19．4283％ ，其余成分含量較低，萃取效果好。

　　3．3 氣相檢測(cè) 乙醚的氣相分析結(jié)果顯示，有一個(gè)含量97．07676％，可能由于乙醚提取物中其他物質(zhì)不易汽化，也可能由于得到了比較純的有效成分。乙酸乙酯的分析結(jié)果沒(méi)有乙醚好，但是也有兩個(gè)組分含量較高，只是雜質(zhì)含量也較多，萃取效果沒(méi)有乙醚好。

　　乙醚、甲醇中均只有一種物質(zhì)含量特別高，分別為97．07676％、99．34304％；可以對(duì)乙醚及甲醇的提取物做進(jìn)一步的測(cè)定和研究。丙酮中有兩種物質(zhì)的成分含量比較高，分別是1號(hào)45．61510％ ，2號(hào)52．88958％ ，其他成分含量很低。

　　3．4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果嘗試了用不同萃取劑對(duì)三葉青進(jìn)行提取，筆耕文化傳播，并檢測(cè)其成分含量。在萃取溶劑的選擇方面，乙酸乙酯、乙醚與甲醇的萃取效果較好。但是由于成分比較復(fù)雜，實(shí)驗(yàn)室條件限制等原因，未對(duì)有效成分做進(jìn)一步分離。本研究發(fā)現(xiàn)，水提法在沸水煎煮的狀態(tài)下提取效果比較好，用有機(jī)溶劑提取的效果也不錯(cuò)，回流提取并不可取；本實(shí)驗(yàn)僅用了，液相色譜分析與氣象色譜分析，簡(jiǎn)單使用過(guò)質(zhì)譜儀，對(duì)于三葉青中未知成分結(jié)構(gòu)的鑒定還需要更多更有效的檢測(cè)方法和儀器。

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