發(fā)布時(shí)間：2025-01-04 04:19

　　 對(duì)串聯(lián)風(fēng)疹病毒(Rubella virus,RV) 3個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白6個(gè)免疫顯性區(qū)域進(jìn)行制備(命名為B103),并將其應(yīng)用于血清學(xué)診斷中。選取RV C aa 1–30&aa 96–123、E2 aa 31–105和E1 aa 11–39&aa 154–277&aa 389–412等6個(gè)免疫顯性區(qū)域,將其串聯(lián)并基因合成;將此基因片段插入TRX和His標(biāo)簽之間構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒;蛋白B103在大腸桿菌BL21(DE3)中誘導(dǎo)表達(dá),并利用Streamline Chelating親和層析和DEAE陰離子交換層析純化目的蛋白,Sephadex G-25分子篩分析其折疊情況及均一性;利用免疫印跡技術(shù)對(duì)蛋白B103的抗原性進(jìn)行鑒定,并建立RV-IgM抗體捕獲法ELISA檢測技術(shù),初步評(píng)價(jià)此方法對(duì)陰陽血清樣本的鑒別能力。蛋白B103以可溶性形式表達(dá),其表達(dá)量約占菌體總蛋白的18.57%,經(jīng)純化后蛋白B103濃度為3.026 mg/mL,純度為95.35%;免疫印跡實(shí)驗(yàn)表明蛋白B103能與RV急性期血清發(fā)生反應(yīng);對(duì)40份RV急性期血清及40份RV陰性血清進(jìn)行檢測發(fā)現(xiàn)可以很好地鑒別陰陽性血清...

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

圖1B103表達(dá)質(zhì)粒示意圖Fig.1SchematicdiagramofB103expressionplasmids.

端為His標(biāo)簽，連接臂為GGGSGGGS，以及合適的酶切位點(diǎn)(如NdeⅠ、NcoⅠ和XhoⅠ等)。B103F基因片段大小約800bp，構(gòu)建好的表達(dá)質(zhì)粒經(jīng)測序、雙酶切鑒定及小量表達(dá)證實(shí)構(gòu)建成功，命名為B103質(zhì)粒。小量表達(dá)SDS-PAGE結(jié)果發(fā)現(xiàn)，目的蛋白分子量與預(yù)期相同，約為44....

圖3蛋白B103凝膠過濾分析Fig.3GelfiltrationanalysisofB103protein.

主要分布于200mmol/LNaCl洗脫液中，純度為95.35%，濃度為3.026mg/mL(圖2B)。經(jīng)過凝膠過濾層析發(fā)現(xiàn)(圖3)，純化后的蛋白B103存在于單一洗脫峰中，峰尖而且分布優(yōu)異表明其成分均一性優(yōu)異，折疊成熟，可以作為檢測抗原應(yīng)用于ELISA檢測中。2.2蛋白B103....

圖5蛋白B103在RV感染血清學(xué)診斷效果評(píng)價(jià)Fig.5TheevaluationofthediagnosticeffectofproteinB103onRVinfection.

ISSN1000-3061CN11-1998/Q生物工程學(xué)報(bào)ChinJBiotechhttp://journals.im.ac.cn/cjbcn1534圖5蛋白B103在RV感染血清學(xué)診斷效果評(píng)價(jià)Fig.5Theevaluationofthediagnosticeffectofp....

本文編號(hào)：4022893