A型產(chǎn)氣莢膜梭菌是引起各種動物壞死性腸炎、腸毒血癥及人類創(chuàng)傷性氣性壞疽的主要病原菌之一,其致病因子是菌體產(chǎn)生的α-毒素,目前尚無有效的防治方法。本研究利用分子生物學技術(shù),克隆、表達了α-毒素基因,對α-毒素免疫原性進行了研究,研究內(nèi)容和結(jié)果如下: 用PCR方法從A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α-毒素高產(chǎn)菌株C57-1中克隆出了1194 bpα-毒素基因,經(jīng)與Genebank列于前三位α-毒素基因序列比較,其同源性高達99%,從而為研究α-毒素基因表達產(chǎn)物免疫原性提供了可靠的基因材料。 構(gòu)建的表達菌株pXETA02經(jīng)ELISA鑒定,能夠特異性地表達出α-毒素蛋白。研究了以IPTG和乳糖兩種為誘導(dǎo)劑在不同條件下對α-毒素表達的影響。IPTG在優(yōu)化條件下誘導(dǎo)重組α-毒素表達,目的蛋白占菌體總蛋白最高比例達35%。乳糖在優(yōu)化條件下誘導(dǎo)重組α-毒素表達,目的蛋白占菌體總蛋白最高比例達23%。從而為大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)重組α-毒素提供參考數(shù)據(jù)。 對重組α-毒素進行了生物毒性測定和免疫原性研究,我們所獲得的重組α-毒素喪失了天然毒性,但卻有良好的免疫原性,從而為生產(chǎn)重組α-毒素基因工程疫苗提供了良好的候選菌株。 本研究獲得了理想的α-毒素基因材料及其表達菌株,這將為下一步研究α-毒素基因突變和含α-毒素多價基因工程疫苗打下堅實的基礎(chǔ)。
【學位單位】：寧夏大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2005
【中圖分類】：R378
【文章目錄】：
第一章 引言
第二章 A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α—毒素基因的克隆與基因功能預(yù)測
    2.1 實驗材料
    2.2 常用培養(yǎng)基和溶液的配置
    2.3 實驗方法
    2.4 結(jié)果與分析
    2.5 討論
第三章 α—毒素基因表達質(zhì)粒的構(gòu)建
    3.1 實驗材料
    3.2 常用培養(yǎng)基和溶液的配置
    3.3 實驗方法
    3.4 結(jié)果與分析
    3.5 討論
第四章 α—毒素基因高效表達條件的優(yōu)化
    4.1 實驗材料
    4.2 常用培養(yǎng)基和溶液的配置
    4.3 實驗方法
    4.4 結(jié)果與分析
    4.5 討論
第五章 A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α—毒素免疫原性研究
    5.1 實驗材料
    5.2 常用培養(yǎng)基和溶液的配置
    5.3 實驗方法
    5.4 結(jié)果與分析
    5.5 討論
第六章 結(jié)論
參考文獻
綜述
    綜述參考文獻
致謝
作者簡歷

【參考文獻】

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1 趙志軍,許崇波,曾瑾,王玉炯;A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素基因的高效表達[J];生物技術(shù);2004年05期

2 許崇波,朱平,姚湘燕,甘永華,馮書章,馬從林,孟銳奇;產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素基因工程菌表達產(chǎn)物的免疫原性研究[J];畜牧與獸醫(yī);1998年06期

本文編號：2893876