發(fā)布時間：2020-11-21 03:00

　　 【背景】由于抗生素的大量使用,導(dǎo)致細(xì)菌耐藥性越來越強(qiáng),尋找新的抗細(xì)菌感染藥物成為研究熱點(diǎn)�！灸康摹靠寺”磉_(dá)群體感應(yīng)淬滅酶,探究其對銅綠假單胞菌毒力及致病性的影響。【方法】利用PCR技術(shù)從產(chǎn)群體感應(yīng)淬滅酶的芽孢桿菌QSI-1基因組DNA中克隆出aiiA基因,將其克隆到表達(dá)載體pET30a并導(dǎo)入大腸桿菌E.coliBL21(DE3)中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),通過鎳柱親和層析獲得純化的N-�；�高絲氨酸內(nèi)酯酶。用不同濃度的淬滅酶作用于銅綠假單胞菌,檢測其對銅綠假單胞菌毒力因子產(chǎn)生以及生物膜形成能力的影響;以秀麗隱桿線蟲為模型,考察其對線蟲感染銅綠假單胞菌存活率的影響�！窘Y(jié)果】克隆表達(dá)出群體感應(yīng)淬滅酶,該酶能顯著抑制銅綠假單胞菌毒力因子產(chǎn)生和生物膜的形成,并能降低銅綠假單胞菌對感染線蟲的致死率�！窘Y(jié)論】群體感應(yīng)淬滅酶可作為一種能高效抑制細(xì)菌致病性的物質(zhì),為臨床治療細(xì)菌性感染提供新的策略。
【部分圖文】：

2930微生物學(xué)通報Microbiol.ChinaTel:010-64807511;E-mail:tongbao@im.ac.cn;http://journals.im.ac.cn/wswxtbcn圖1PCR產(chǎn)物電泳Figure1PCRproductsofaiiAgene圖2表達(dá)的AiiA蛋白SDS-PAGE圖Figure2SDS-PAGEanalysisofAiiAprotein圖3AiiA群體感應(yīng)淬滅活性測定Figure3CharacterizationofthequorumquenchingactivityofAiiA時稍有減弱，仍達(dá)到42.40%，如圖4A所示。淬滅酶對鼠李糖脂也有顯著的抑制作用，實(shí)驗(yàn)組產(chǎn)生鼠李糖脂的水平降到對照組的40%以下，如圖4B所示。為了更好地檢測總蛋白酶生成的變化，采用脫脂奶平板法，實(shí)驗(yàn)組溶蛋白圈大小明顯小于對照組，說明淬滅酶抑制了銅綠假單胞菌蛋白酶的產(chǎn)生，如圖4C所示。2.3群體感應(yīng)淬滅酶對銅綠假單胞菌生物膜產(chǎn)生的影響采用結(jié)晶紫染色法測定淬滅酶對PA生物膜形圖4群體感應(yīng)淬滅酶對銅綠假單胞菌毒力因子產(chǎn)生的影響Figure4EffectsofAiiAonvirulencefactorsproductionofPseudomonasaeruginosa注：A：綠膿菌素；B：鼠李糖脂；C：蛋白酶.*：P<0.05.Note:A:Pyocyanin;B:Rhamnolipid;C:Protease.*:P<0.05.

2930微生物學(xué)通報Microbiol.ChinaTel:010-64807511;E-mail:tongbao@im.ac.cn;http://journals.im.ac.cn/wswxtbcn圖1PCR產(chǎn)物電泳Figure1PCRproductsofaiiAgene圖2表達(dá)的AiiA蛋白SDS-PAGE圖Figure2SDS-PAGEanalysisofAiiAprotein圖3AiiA群體感應(yīng)淬滅活性測定Figure3CharacterizationofthequorumquenchingactivityofAiiA時稍有減弱，仍達(dá)到42.40%，如圖4A所示。淬滅酶對鼠李糖脂也有顯著的抑制作用，實(shí)驗(yàn)組產(chǎn)生鼠李糖脂的水平降到對照組的40%以下，如圖4B所示。為了更好地檢測總蛋白酶生成的變化，采用脫脂奶平板法，實(shí)驗(yàn)組溶蛋白圈大小明顯小于對照組，說明淬滅酶抑制了銅綠假單胞菌蛋白酶的產(chǎn)生，如圖4C所示。2.3群體感應(yīng)淬滅酶對銅綠假單胞菌生物膜產(chǎn)生的影響采用結(jié)晶紫染色法測定淬滅酶對PA生物膜形圖4群體感應(yīng)淬滅酶對銅綠假單胞菌毒力因子產(chǎn)生的影響Figure4EffectsofAiiAonvirulencefactorsproductionofPseudomonasaeruginosa注：A：綠膿菌素；B：鼠李糖脂；C：蛋白酶.*：P<0.05.Note:A:Pyocyanin;B:Rhamnolipid;C:Protease.*:P<0.05.

2930微生物學(xué)通報Microbiol.ChinaTel:010-64807511;E-mail:tongbao@im.ac.cn;http://journals.im.ac.cn/wswxtbcn圖1PCR產(chǎn)物電泳Figure1PCRproductsofaiiAgene圖2表達(dá)的AiiA蛋白SDS-PAGE圖Figure2SDS-PAGEanalysisofAiiAprotein圖3AiiA群體感應(yīng)淬滅活性測定Figure3CharacterizationofthequorumquenchingactivityofAiiA時稍有減弱，仍達(dá)到42.40%，如圖4A所示。淬滅酶對鼠李糖脂也有顯著的抑制作用，實(shí)驗(yàn)組產(chǎn)生鼠李糖脂的水平降到對照組的40%以下，如圖4B所示。為了更好地檢測總蛋白酶生成的變化，采用脫脂奶平板法，實(shí)驗(yàn)組溶蛋白圈大小明顯小于對照組，說明淬滅酶抑制了銅綠假單胞菌蛋白酶的產(chǎn)生，如圖4C所示。2.3群體感應(yīng)淬滅酶對銅綠假單胞菌生物膜產(chǎn)生的影響采用結(jié)晶紫染色法測定淬滅酶對PA生物膜形圖4群體感應(yīng)淬滅酶對銅綠假單胞菌毒力因子產(chǎn)生的影響Figure4EffectsofAiiAonvirulencefactorsproductionofPseudomonasaeruginosa注：A：綠膿菌素；B：鼠李糖脂；C：蛋白酶.*：P<0.05.Note:A:Pyocyanin;B:Rhamnolipid;C:Protease.*:P<0.05.
【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

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本文編號：2892420