發(fā)布時(shí)間：2020-11-21 01:09

　　 目的:構(gòu)建pCDNA3.1-MT2A真核表達(dá)載體并觀察其在293T和SMMC7721細(xì)胞株中的定位和表達(dá)情況。方法:使用基因合成法合成MT2A基因,在其N端添加Kozak序列及His標(biāo)簽序列,將擴(kuò)增后的目的基因雙酶切連接至pcDNA3.1(+)載體的BamHⅠ和NotⅠ之間。轉(zhuǎn)化DH5α大腸桿菌后,挑取陽(yáng)性克隆子進(jìn)行質(zhì)粒抽提電泳及測(cè)序鑒定。將鑒定正確的pCDNA3.1-MT2A質(zhì)粒采用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染293T和SMMC7721細(xì)胞株,激光共聚焦顯微鏡觀察其在真核細(xì)胞中的表達(dá)和定位情況。結(jié)果:pCDNA3.1-MT2A重組質(zhì)粒經(jīng)酶切電泳及DNA測(cè)序證實(shí),目的基因MT2A的序列完全正確,真核表達(dá)載體構(gòu)建成功,激光共聚焦觀察發(fā)現(xiàn)該重組質(zhì)粒表達(dá)于293T和SMMC7721細(xì)胞的胞質(zhì)中。結(jié)論:成功構(gòu)建pCDNA3.1-MT2A融合基因并進(jìn)行真核表達(dá),發(fā)現(xiàn)MT2A主要定位于293T和SMMC7721細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中。本研究為探討MT2A在肝癌細(xì)胞內(nèi)的功能奠定了基礎(chǔ)。
【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要實(shí)驗(yàn)材料
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 載體構(gòu)建
        1.2.2 細(xì)胞準(zhǔn)備
        1.2.3 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        1.2.4 激光共聚焦定位
2 結(jié)果
    2.1 真核表達(dá)載體的鑒定
    2.2 陽(yáng)性克隆測(cè)序及比對(duì)
    2.3 激光共聚焦顯微鏡觀察MT2A在細(xì)胞中的定位
3 討論

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 李新穎;潘林鑫;耿慧武;劉君;劉曉穎;范禮斌;;人MT2A基因在哺乳動(dòng)物細(xì)胞株中的定位與表達(dá)[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2013年03期

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 唐仁生;夏建紅;王玉梅;龔世園;喻達(dá)輝;;大珠母貝金屬硫蛋白cDNA克隆與序列特征分析[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2009年07期

2 徐玉鳳;李一勤;劉進(jìn)元;;水稻新型MT基因的鑒定及其基因家族分子特征分析[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2009年26期

3 徐玉鳳;李一勤;劉進(jìn)元;;水稻3型金屬硫蛋白基因的分離和表達(dá)研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2009年27期

4 馬蘭軍;李峰;由文華;;鋅-金屬硫蛋白對(duì)力竭運(yùn)動(dòng)大鼠肝臟和股四頭肌線粒體ATPase損傷的保護(hù)作用[J];安徽師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2010年06期

5 田子強(qiáng);王小玲;吳偉;李保慶;王永軍;;金屬硫蛋白3在食管癌組織中的表達(dá)及其與金屬硫蛋白1和2表達(dá)的關(guān)系[J];癌癥;2008年02期

6 高霖,王冬艷,李揚(yáng),石彥榮,卜定方,龐永正,唐朝樞;大鼠心肌成纖維細(xì)胞合成金屬硫蛋白[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2003年01期

7 邱永祥,阮明,賈鳳蘭,邱飛嬋,李雪婷,尚蘭琴,張寶旭;金屬硫蛋白對(duì)秋水仙堿致肝毒性的保護(hù)作用[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2005年05期

8 張彬;肖定福;李麗立;陳宇光;王瑩;吳宗明;張復(fù)生;蘭欣怡;;金屬硫蛋白在奶牛公犢體內(nèi)的代謝規(guī)律研究[J];草業(yè)學(xué)報(bào);2008年06期

9 楊利榮;張敏紅;;金屬硫蛋白與應(yīng)激反應(yīng)[J];動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào);2011年07期

10 吳睿;張敏紅;馮京海;鄭姍姍;;日循環(huán)高溫對(duì)肉雞組織鋅離子濃度及金屬硫蛋白含量的影響[J];動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào);2011年08期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 劉林;與神經(jīng)退行性疾病相關(guān)的氧化還原活性金屬絡(luò)合物的研究[D];中南大學(xué);2011年

2 孫路虹;人肝癌低表達(dá)基因MT1M的克隆和功能研究[D];南京師范大學(xué);2003年

3 陳亮;金屬硫蛋白，金屬硫蛋白抗體與鎘致腎功能損傷[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

4 蔡斌;人類神經(jīng)生長(zhǎng)抑制因子的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)與功能[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

5 胡南;一株耐鎘惡臭假單胞菌的分離鑒定及其重要的鎘抗性相關(guān)基因的克隆[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

6 帥怡;金屬硫蛋白抗阿霉素心臟毒性作用的基因組學(xué)與蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];四川大學(xué);2007年

7 夏妍;海州香薷耐銅性和金屬硫蛋白基因克隆及功能分析[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

8 張彬;金屬硫蛋白在豬和奶牛體內(nèi)的誘導(dǎo)合成、代謝規(guī)律及抗應(yīng)激調(diào)控機(jī)理研究[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

9 武貝;海州香薷Cu耐性與積累機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2009年

10 孫明然;伴有肝臟損傷的肝豆?fàn)詈俗冃曰颊逜TP7B基因變異分析[D];吉林大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 胡楠;香煙引起的心力衰竭機(jī)制及金屬硫蛋白對(duì)小鼠心肌的保護(hù)研究[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

2 李偉;三聚氰胺對(duì)單細(xì)胞生物四膜蟲(chóng)影響的研究[D];山東師范大學(xué);2011年

3 任明;金屬硫蛋白對(duì)百草枯致小鼠急性肺損傷的保護(hù)效應(yīng)及機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2011年

4 楊利榮;熱應(yīng)激肉雞金屬硫蛋白的變化及皮質(zhì)酮的介導(dǎo)作用[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2011年

5 吳睿;熱應(yīng)激對(duì)肉雞金屬硫蛋白含量的影響及鋅的調(diào)節(jié)作用[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2011年

6 張志明;河南華溪蟹重組金屬硫蛋白的原核表達(dá)[D];山西大學(xué);2011年

7 徐團(tuán);鎘致河南華溪蟹精巢氧化損傷與細(xì)胞凋亡機(jī)制的研究[D];山西大學(xué);2011年

8 閆長(zhǎng)會(huì);鉑類抗腫瘤藥體外腎毒性的比較研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2004年

9 劉維青;海灣扇貝金屬硫蛋白cDNA序列克隆及其在鎘和鰻弧菌誘導(dǎo)下的表達(dá)研究[D];中國(guó)海洋大學(xué);2005年

10 趙欣;白血病骨髓hZIP1，ZnT1基因表達(dá)特點(diǎn)及上清鋅含量測(cè)定的實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2006年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 耿慧武;劉君;陳應(yīng)爐;楊軍;劉曉穎;范禮斌;;人cystatinB基因在哺乳動(dòng)物細(xì)胞株中的定位與表達(dá)[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2012年04期

本文編號(hào)：2892288