發(fā)布時(shí)間：2020-11-20 18:53

　　 目的 構(gòu)建并鑒定人CD154反義RNA的真核表達(dá)載體，通過觀察其對(duì)Jurkat細(xì)胞CD154分子表達(dá)的影響，確定其有效性。 方法 從正常人外周血單個(gè)核細(xì)胞提取mRNA，利用RT-PCR擴(kuò)增CD154胞外段序列，使用T-A克隆技術(shù)形成PCR產(chǎn)物的克隆-pUCm-T／CD154，并進(jìn)行基因測(cè)序。根據(jù)測(cè)序結(jié)果，應(yīng)用亞克隆技術(shù)反向接入真核表達(dá)載體-pcDNA3，構(gòu)建載體／目的基因片段重組體-pcDNA3／CD154，雙酶切法進(jìn)行鑒定。以脂質(zhì)體為介質(zhì)將其轉(zhuǎn)導(dǎo)到Jurkat細(xì)胞中，利用流式細(xì)胞儀，檢測(cè)未受PHA-P刺激、刺激24h和刺激48h三個(gè)不同時(shí)間CD154的表達(dá)情況，對(duì)照組為轉(zhuǎn)導(dǎo)pcDNA3空載體組。 結(jié)果 1 人CD154反義RNA的真核表達(dá)載體經(jīng)雙酶切檢驗(yàn)證明構(gòu)建成功。2 在各個(gè)時(shí)段，轉(zhuǎn)導(dǎo)pcDNA3／CD154的實(shí)驗(yàn)組Jurkat細(xì)胞CD154的表達(dá)均較轉(zhuǎn)導(dǎo)pcDNA3空載體對(duì)照組明顯減少。 結(jié)論 成功的合成了反義RNA真核表達(dá)載體-pcDNA3／CD154，此載體可有效的降低Jurkat細(xì)胞CD154分子的表達(dá)。
【學(xué)位單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2002
【中圖分類】：R346
【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 CD154反義RNA真核表達(dá)載體的構(gòu)建和鑒定
第二部分 CD154／pcDNA3對(duì)Jurkat細(xì)胞CD154表達(dá)影響的檢測(cè)
總結(jié)
參考文獻(xiàn)
附圖
綜述： CD40和CD154與疾病的關(guān)系
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷

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本文編號(hào)：2891839