發(fā)布時間：2020-11-20 18:53

　　 目的 構建并鑒定人CD154反義RNA的真核表達載體，通過觀察其對Jurkat細胞CD154分子表達的影響，確定其有效性。 方法 從正常人外周血單個核細胞提取mRNA，利用RT-PCR擴增CD154胞外段序列，使用T-A克隆技術形成PCR產(chǎn)物的克隆-pUCm-T／CD154，并進行基因測序。根據(jù)測序結果，應用亞克隆技術反向接入真核表達載體-pcDNA3，構建載體／目的基因片段重組體-pcDNA3／CD154，雙酶切法進行鑒定。以脂質(zhì)體為介質(zhì)將其轉導到Jurkat細胞中，利用流式細胞儀，檢測未受PHA-P刺激、刺激24h和刺激48h三個不同時間CD154的表達情況，對照組為轉導pcDNA3空載體組。 結果 1 人CD154反義RNA的真核表達載體經(jīng)雙酶切檢驗證明構建成功。2 在各個時段，轉導pcDNA3／CD154的實驗組Jurkat細胞CD154的表達均較轉導pcDNA3空載體對照組明顯減少。 結論 成功的合成了反義RNA真核表達載體-pcDNA3／CD154，此載體可有效的降低Jurkat細胞CD154分子的表達。
【學位單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2002
【中圖分類】：R346
【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 CD154反義RNA真核表達載體的構建和鑒定
第二部分 CD154／pcDNA3對Jurkat細胞CD154表達影響的檢測
總結
參考文獻
附圖
綜述： CD40和CD154與疾病的關系
致謝
個人簡歷

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本文編號：2891839