大氣壓低溫等離子體射流對(duì)白色念珠菌生物膜的殺滅效果
【部分圖文】：
）購自中國普通微生物菌種保藏管理中心；沙氏瓊脂、沙氏培養(yǎng)基購自北京陸橋生物技術(shù)有限公司；碘化丙啶（ＰＩ）染色試劑盒購自江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司。１．１．２大氣壓低溫等離子體裝置本研究采用的等離子體發(fā)生裝置屬于微型滑動(dòng)弧放電（圖１），裝置高壓電源采用０～３０ｋＶ可調(diào)的高頻諧振高壓電源，氣泵流速為１０Ｌ／ｍｉｎ，工作氣體為空氣，空氣通過等離子體發(fā)生器產(chǎn)生低溫等離子體射流，通過噴嘴進(jìn)行殺菌，噴嘴內(nèi)徑為０．５ｍｍ。圖１等離子體裝置示意圖Ｆｉｇ１Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｔｈｅｐｌａｓｍａｇｅｎｅｒａｔｏｒ１．２方法１．２．１白色念珠菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定將白色念珠菌新鮮培養(yǎng)物按１∶５００比例接種于沙氏培養(yǎng)基，于３７℃、１５０ｒ／ｍｉｎ培養(yǎng)，沙氏培養(yǎng)基空白調(diào)零，每間隔３ｈ在５３０ｎｍ的波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值（Ａ５３０值），以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，Ａ５３０值為縱坐標(biāo)繪制生長(zhǎng)曲線。１．２．２白色念珠菌生物膜的培養(yǎng)及其穩(wěn)定性測(cè)定取５ｍＬ達(dá)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的新鮮真菌培養(yǎng)物，３０００×ｇ離心５ｍｉｎ，棄上清，用ＰＢＳ洗滌后以５ｍＬＰＢＳ重懸；�。矗埃唉蹋叹鷳乙海s６×１０５ＣＦＵ／ｍＬ）加至２４孔板，３７℃培養(yǎng)２４ｈ、７２ｈ；培養(yǎng)結(jié)束后，ＰＢＳ洗滌３次，自然干燥后于顯微鏡下觀察白色念珠菌生物膜形態(tài)。取定植白色念珠菌生物膜的２４孔板，每孔加入４００μＬＰＢＳ，２０ｋＨｚ超聲１５ｍｉｎ，收集懸液倍比稀釋，取適當(dāng)稀釋度
第３期蒲啟康等：大氣壓低溫等離子體射流對(duì)白色念珠菌生物膜的殺滅效果符合正態(tài)分布或方差不齊時(shí)則采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)。α＝０．０５。２結(jié)果２．１白色念珠菌的生長(zhǎng)曲線如圖２所示，白色念珠菌在培養(yǎng)約１５ｈ后進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期（Ａ５３０＝０．５～２．５），為保證生物膜培養(yǎng)條件的穩(wěn)定性，本研究采用Ａ５３０＝１．０時(shí)的白色念珠菌培養(yǎng)物來進(jìn)行生物膜培養(yǎng)。２．２白色念珠菌生物膜培養(yǎng)及其穩(wěn)定性白色念珠菌生物膜培養(yǎng)不同時(shí)間后的形態(tài)如圖３Ａ、３Ｂ所示，培養(yǎng)２４ｈ后，白色念珠菌開始黏附聚集，但鏡下形態(tài)比較松散，仍有許多懸浮菌存在；培養(yǎng)７２ｈ后，白色念珠菌生物膜結(jié)構(gòu)完全成熟，在鏡下以緊密聚集的形式黏附在２４孔板底部，結(jié)果表明以２４孔板作為黏附載體、以ＰＢＳ作為介質(zhì)培養(yǎng)７２ｈ可獲得具備典型生物膜特征的成熟白色念珠菌生物膜。將６組經(jīng)７２ｈ培養(yǎng)的白色念珠菌生物膜進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)，結(jié)果如圖３Ｃ所示，每組的活菌計(jì)數(shù)值均集中在１０５．５～１０６．０ＣＦＵ，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＞０．０５）。圖２白色念珠菌生長(zhǎng)曲線Ｆｉｇ２ＧｒｏｗｔｈｃｕｒｖｅｏｆＣ．ａｌｂｉｃａｎｓ２．３大氣壓低溫等離子體射流作用不同時(shí)間的殺菌效果圖３不同培養(yǎng)時(shí)間白色念珠菌生物膜的形態(tài)及其穩(wěn)定性分析。×１０Ｆｉｇ３ＡｎａｌｙｓｉｓｏｆｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙｏｆＣ．ａｌｂｉｃａｎｓｂｉｏｆｉｌｍｕｎｄｅｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｕｌｔｕｒｅｔｉｍｅ．×１０ＢｉｏｆｉｌｍｏｆＣ．ａｌｂｉ
１０ＢｉｏｆｉｌｍｏｆＣ．ａｌｂｉｃａｎｓａｆｔｅｒ２４ｈ（Ａ）ａｎｄ７２ｈ（Ｂ）ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎｉｎＰＢＳｓｏｌｕｔｉｏｎ；Ｃ：Ｖｉａｂｌｅｃｏｕｎｔｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓ（珚ｘ±ｓ）ｏｆｅａｃｈｐａｒａｌｌｅｌｗｅｌｌａｆｔｅｒ７２ｈｂｉｏｆｉｌｍｆｏｒｍａｔｉｏｎ；Ａｒｒｏｗｓｐｏｉｎｔｔｏｔｈｅｂｌａｃｋｈｏｌｅｉｎｄｉｃａｔｉｎｇｐｏｌｙｓｔｙｒｅｎｅｗｅｌｌｗｉｔｈｏｕｔｂｉｏｆｉｌｍ大氣壓低溫等離子體對(duì)白色念珠菌生物膜的殺滅效果與作用時(shí)間的關(guān)系如圖４所示，白色念珠菌的活菌數(shù)隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)降低的趨勢(shì)，當(dāng)作用時(shí)間≥１５ｓ時(shí)，與作用０ｓ組活菌數(shù)相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．００５）；當(dāng)作用時(shí)間達(dá)２０ｓ時(shí)，白色念珠菌活菌數(shù)由１０５．６２ＣＦＵ降至１０４．３７ＣＦＵ（Ｐ＜０．００５），約９０％活菌被殺滅；作用時(shí)間≥５５ｓ后，活菌數(shù)減少至檢出限以下。２．４大氣壓低溫等離子體射流作用后白色念珠菌死亡情況如圖５所示，隨著作用時(shí)間的增加，白色念珠菌的著色部分比例增加，并出現(xiàn)高亮區(qū)，說明該大氣壓低溫等離子體對(duì)白色念珠菌的細(xì)胞膜具有破壞作用，隨著時(shí)間的增加，對(duì)生物膜的破壞程度、面積也相應(yīng)增加。圖４大氣壓低溫等離子體作用不同時(shí)間對(duì)生物膜的影響Ｆｉｇ４Ｖｉａｂｌｅｃｏｕｎｔｉｎｇｏｆｂｉｏｆｉｌｍａｆｔｅｒｐｌａｓｍａｔｒｅａｔｍｅｎｔｆｏｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｅｘｐｏｓｕｒｅｔｉｍｅ＊Ｐ＜０．００５，ｖｓ．０ｓ．Ｄａｓｈｌｉｎｅ：Ｌｉｍｉｔｏｆｄｅｔｅｃｔｉｏｎ１
【參考文獻(xiàn)】
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【共引文獻(xiàn)】
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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】
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