發(fā)布時間：2020-11-14 16:10

　　 【目的】闡明霍亂弧菌ToxR蛋白功能調控的分子機制�！痉椒ā坷�用巰基捕獲(thiol-trapping)的方法分析DsbA蛋白對ToxR周質空間結構域半胱氨酸殘基的氧化作用;采用定點突變的方法構建ToxR半胱氨酸突變株(ToxR_(C236/293S));利用熒光素酶基因作為報告基因分析ToxR野生型(ToxR_(wt))和半胱氨酸突變體(ToxR_(C236/293S))誘導下游基因表達的活性;通過細菌雙雜交系統分析ToxR_(wt)和ToxR_(C236/293S)蛋白之間、ToxR與ToxS之間以及ToxS之間的相互作用�！窘Y果】ToxR周質空間結構域半胱氨酸殘基確實可以被DsbA蛋白氧化,且當ToxR與ToxS共表達時,ToxR誘導ctxAB轉錄表達的活性顯著增強,且在dsbA基因缺失突變株中ToxR誘導ctxAB轉錄表達的活性更高;成功構建株霍亂弧菌ToxR半胱氨酸突變株(ToxR_(C236/293S)),在沒有ToxS存在的條件下,ToxR_(C236/293S)誘導毒力基因表達的活性與ToxRwt相當;細菌雙雜交系統分析發(fā)現當ToxR與ToxS共轉錄表達時,ToxS極大增強ToxR蛋白之間的互作;在dsbA基因缺失突變株中,ToxS之間的相互作用顯著增強�！窘Y論】ToxR蛋白本身的氧還狀態(tài)對其誘導毒力基因表達的活性沒有影響;ToxS通過增強ToxR形成二聚體的能力從而增強其誘導毒力基因的表達,而DsbA對ToxS蛋白之間的相互作用具有抑制作用,DsbA通過影響ToxS的蛋白互作從而影響ToxR蛋白的功能。本文為進一步闡明霍亂弧菌毒力基因表達調控的分子機制提供重要的理論依據。
【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株、質粒和培養(yǎng)條件:
        1.1.2 主要試劑:
    1.2 ToxR蛋白的氧還狀態(tài)分析
    1.3 熒光素酶報告基因表達分析
    1.4 細菌雙雜交系統驗證ToxR蛋白之間的相互作用
2 結果和分析
    2.1 霍亂弧菌ToxR蛋白可以被DsbA氧化
    2.2 DsbA對ToxR蛋白功能的影響
    2.3 ToxRC236/293S誘導下游基因表達的功能分析
    2.4 ToxR與ToxS蛋白之間的相互作用
3 討論

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