發(fā)布時(shí)間：2020-11-10 06:15

　　 結(jié)核病是目前單一致病菌感染導(dǎo)致死亡率最高的感染性疾病。其病原體結(jié)核桿菌,是一種細(xì)胞內(nèi)寄生菌,它是以宿主免疫系統(tǒng)對(duì)抗微生物感染的重要成分之一——巨噬細(xì)胞作為其宿主細(xì)胞。結(jié)核感染后,機(jī)體可產(chǎn)生強(qiáng)有力的抗結(jié)核免疫應(yīng)答,包括巨噬細(xì)胞、CD4~+T淋巴細(xì)胞、CD8~+T淋巴細(xì)胞等參與的細(xì)胞免疫應(yīng)答及特異性體液免疫應(yīng)答,以控制結(jié)核桿菌感染。然而,結(jié)核桿菌通過(guò)干擾T淋巴細(xì)胞對(duì)感染結(jié)核桿菌的巨噬細(xì)胞的識(shí)別及對(duì)抗巨噬細(xì)胞的殺菌機(jī)制等逃避宿主免疫系統(tǒng)的監(jiān)視和攻擊,在機(jī)體內(nèi)長(zhǎng)期持續(xù)存活而呈潛伏感染狀態(tài)。當(dāng)機(jī)體感染HIV、使用免疫抑制劑或衰老等導(dǎo)致免疫功能低下時(shí),潛伏感染結(jié)核桿菌大量繁殖而引起結(jié)核病的發(fā)生。目前,全世界有三分之一的人口感染結(jié)核桿菌,其中有90%左右人群處于潛伏感染狀態(tài)。這一龐大的群體是結(jié)核發(fā)病的主要來(lái)源之一,因此也是控制結(jié)核病全球性蔓延的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。
【學(xué)位單位】：四川大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2004
【中圖分類】：R392
【部分圖文】：

學(xué)碩士學(xué)位論文結(jié)核分支桿菌PE家族蛋白質(zhì)Rvl818c梭基端片段免疫功能的研究測(cè)發(fā)現(xiàn)所提取的總RNA呈清晰的三條帶分布(285、185、5.顯降解(圖9)。以質(zhì)粒penNA一ESAT一6、peDNA一EP轉(zhuǎn)/c3T3細(xì)胞總NRA為模板用珊I逆轉(zhuǎn)錄試劑盒合成總Dc以引物Pel和PpZ、Pel和PpZ進(jìn)行PRC擴(kuò)增檢測(cè)，結(jié)果約280bp及1.4kb的特異性條帶，而以此總RNA為模引物直接作PRC擴(kuò)增或以空白質(zhì)粒pDcNA3.1/Myc一HIS(胞的總RNA為模板進(jìn)行RT一PRC擴(kuò)增均未檢測(cè)到任何表明結(jié)核分支桿菌免疫優(yōu)勢(shì)抗原ESAT一6完整基T一6一PGRS融合基因能在Balb/c3T3細(xì)胞中進(jìn)行穩(wěn)定表圖11)。附圖

Pel和P3e及PPI和PpZ分別進(jìn)行PRC擴(kuò)增，前二者均得到大小約28b0p的特異性片段，后者得到及1100Pb的特異片段，與預(yù)計(jì)目的基因片段大小相符。(圖2)二.真核重組質(zhì)粒pDcNA一ESAT一6及pDcNA一EP的鑒定結(jié)果:1.真核重組質(zhì)粒pcDNA一ESAT一的鑒定結(jié)果:pcDNA一ESAT一6陽(yáng)性重組子分別經(jīng)BaHmI及EcRoI進(jìn)行雙酶切，瓊脂糖凝膠電泳分別見(jiàn)到28Obp及5.ksb兩個(gè)片段(圖3)。以pDcNA一EsAT一6為模板，Pel及PeZ為引物擴(kuò)增大小約280bp的特異性片段(圖4)。真核重組質(zhì)粒pDcNA一ESAT一6經(jīng)華大基因上海鼎安生物科技有限公司測(cè)序，測(cè)序報(bào)告(圖7)確定重組質(zhì)粒pDcNA一ESAT一6中正確連入ESAT一6開(kāi)放讀碼框。上述結(jié)果表明真核重組質(zhì)粒pDcNA一ESAT一6構(gòu)建成功。2.真核重組質(zhì)粒pDcNA一EP的鑒定結(jié)果:pcDNA一EP陽(yáng)性重組子分別經(jīng)BaHnlI、BspTI和EeoRI及BaHnlI和EeoRI進(jìn)行雙酶切，瓊脂糖凝膠電泳分別見(jiàn)到280bp、2.Ikb及5.skb、1.4kb及5.skb兩個(gè)片段(圖5)。peDNA一EP為模板，Pel及PpZ為引物擴(kuò)增大小約1.4kb的特異性片段(圖6)。真核重組質(zhì)粒pcDNA一EP經(jīng)\華大基因上海鼎安生物科技有限公司測(cè)序，測(cè)序報(bào)告(圖8)確定重組質(zhì)粒pDcNA一EP中正確連入ESAT一6及PGRSRv18‘8c，且二者通過(guò)酶切位點(diǎn)BPsTI連接形成融合基因。上述結(jié)果表明真核重組質(zhì)粒pcDNA一Ep構(gòu)建成功。三.真核表達(dá)重組質(zhì)粒pDcNA一ESAT一6及pcDNA一EP穩(wěn)定表達(dá)的RT一PCR鑒定結(jié)果:真核表達(dá)重組質(zhì)粒pcDNA一ESAT一6及pDcNA一EP穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Balb/c3T3細(xì)胞用Trizol試劑提取細(xì)胞總RNA

圖4重組質(zhì)粒pDcNAeeESAT一的PCR鑒PCRamPlifieationofES戌I二6rfagmentrfoPlasmidPeDNA~ESA】二6M.marker(DL20(犯)，.APCRPorductESAeesrtrietionenZymemapofereomb三nantPla
【共引文獻(xiàn)】

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