本文選題：乙肝病毒 + Pres　； 參考：《蘭州大學(xué)》2006年碩士論文

【摘要】：乙肝病毒表面蛋白PreS區(qū)在病毒成熟、裝配以及感染人肝細(xì)胞等過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵的作用,因此篩選特異性結(jié)合PreS區(qū)的短肽具有重要的理論和應(yīng)用價(jià)值,將可能為尋找肝細(xì)胞表面病毒相關(guān)的結(jié)合蛋白或受體蛋白提供有用的序列和結(jié)構(gòu)信息,并為研制抗乙肝病毒感染的新藥提供前導(dǎo)分子。 基于噬菌體表面展示隨機(jī)肽文庫(kù)的高通量篩選是目前尋找靶蛋白結(jié)合短肽的優(yōu)選策略之一。本課題中,我們構(gòu)建了M13噬菌體pⅢ蛋白融合的表面展示隨機(jī)肽文庫(kù)。同時(shí),將PreS1～65區(qū)融合于麥芽糖結(jié)合蛋白結(jié)合域,在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá),獲得了可溶性和穩(wěn)定性良好的融合蛋白(MBP-pres1～65)。應(yīng)用親和層析純化的MBP-pres1～65對(duì)隨機(jī)肽文庫(kù)進(jìn)行親和篩選,從線形隨機(jī)5肽文庫(kù)中獲得了一組特異性結(jié)合PreS的噬菌體。 測(cè)定噬菌體表面展示的短肽序列,對(duì)其中可能具有較高PreS結(jié)合親和力的代表性短肽做了體外結(jié)合PreS的研究,證明這些短肽能夠特異性結(jié)合PreS區(qū)。更為重要的是,這些短肽主要結(jié)合于PreS1的殘基21-47區(qū)段,該區(qū)段被認(rèn)為是乙肝病毒(HBV, Hepatitis B virus)附著于肝細(xì)胞質(zhì)膜表面所必需的位點(diǎn)。上述結(jié)果提示這些短肽具有相似的PreS結(jié)合性質(zhì)。對(duì)這些短肽序列的比對(duì)并結(jié)合突變分析推測(cè)出其中與PreS結(jié)合相關(guān)的保守氨基酸序列可能為-W_1T_2X_3W_4W_(5-)。體外結(jié)合實(shí)驗(yàn)表明該保守序列短肽能夠結(jié)合PreS區(qū)。 該保守序列可能存在于結(jié)合PreS的細(xì)胞蛋白中。應(yīng)用該序列在GeneBank中比對(duì),發(fā)現(xiàn)數(shù)個(gè)細(xì)胞蛋白中含有該特征序列。對(duì)這些蛋白空間結(jié)構(gòu)性質(zhì)的分析提示脂蛋白脂酶(LPL)可能結(jié)合PreS。 總之,通過(guò)本項(xiàng)研究,1)獲得了特異性結(jié)合乙肝病毒PreS區(qū)的短肽,這些短肽可能作為阻斷乙肝病毒感染宿主肝細(xì)胞的抑制分子;2)發(fā)現(xiàn)脂蛋白脂酶能夠結(jié)合乙肝病毒顆粒,這支持了本組鄧強(qiáng)博士應(yīng)用M13噬菌體pⅧ蛋白融合的表面展示隨機(jī)12肽肽文庫(kù)結(jié)合thio-PreS和CBD-PreS的結(jié)果,說(shuō)明脂蛋白脂酶可能是一種新的乙肝病毒受體候選蛋白(1)。
[Abstract]:The PreS region of hepatitis B virus surface protein plays a key role in the process of virus maturation, assembly and infection of human hepatocytes. It may provide useful sequence and structural information for searching for binding or receptor proteins related to hepatocyte surface virus and provide leading molecules for the development of new drugs against hepatitis B virus infection. High throughput screening based on phage display random peptide library is one of the best selection strategies for target protein binding peptide. In this study, we constructed a surface display random peptide library for fusion of M 13 phage p 鈪，

本文編號(hào)：2025816