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  本文關(guān)鍵詞： 免提取 醫(yī)學(xué)媒介生物 微量組織 DNA條形碼　出處：《中國媒介生物學(xué)及控制雜志》2014年04期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的為保證DNA條形碼序列模板DNA來源的單一性,和最大程度減少憑證標(biāo)本的形態(tài)破壞,建立一種從醫(yī)學(xué)媒介生物微量組織中免提取,直接擴(kuò)增DNA條形碼序列的方法。方法以螨、蚤、蜱單個個體以及小至蠅類后足1/5跗節(jié)的組織塊為材料,通過優(yōu)化裂解液濃度、裂解液和緩沖液配比,優(yōu)化反應(yīng)體系和反應(yīng)條件,用KOD FX DNA聚合酶進(jìn)行DNA條形碼序列的直接擴(kuò)增,反應(yīng)產(chǎn)物測序,與NCBI基因庫中的序列進(jìn)行比較以驗證其是否被污染。結(jié)果裂解液優(yōu)化為NaOH 50 mmol/L;裂解液和緩沖液配比優(yōu)化為9∶1;反應(yīng)體積優(yōu)化為每50μl反應(yīng)體系中2×KOD FX DNA聚合酶buffer(含Mg2+)25μl、2 mmol/L dNTP 10μl、KOD FX DNA聚合酶(1 U/μl)1μl、正向引物L(fēng)CO1490(20μmol/L)、反向引物HCO2198(20μmol/L)各1μl;反應(yīng)條件優(yōu)化為:95℃3 min;98℃10 s,50℃30 s,68℃1 min,35個循環(huán);68℃7 min。測序結(jié)果顯示無污染,均為有效序列。結(jié)論該方法操作簡單而且省去了DNA提取的步驟,節(jié)約了時間和費用,適合螨、蚤、蜱單個個體以及小至蠅類后足1/5跗節(jié)的組織塊DNA條形碼序列的直接擴(kuò)增。
[Abstract]:Objective To establish a method for extracting DNA barcode sequences from biological micro - tissue of medical medium by optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions with KOD FX DNA polymerase , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , and optimizing reaction conditions .

【作者單位】： 中山出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術(shù)中心;
【基金】：“十二五”國家科技支撐計劃課題(2012BAK11B05) 國家質(zhì)檢總局項目(2012IK223) 廣東出入境檢驗檢疫局課題(2011GDK10,2013GDK36,2013GDK39) 中山市課題(20123A298)~~
【分類號】：R384

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本文編號：1522997