發(fā)布時(shí)間：2018-02-21 22:16

  本文關(guān)鍵詞： 免提取 醫(yī)學(xué)媒介生物 微量組織 DNA條形碼　出處：《中國(guó)媒介生物學(xué)及控制雜志》2014年04期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的為保證DNA條形碼序列模板DNA來(lái)源的單一性,和最大程度減少憑證標(biāo)本的形態(tài)破壞,建立一種從醫(yī)學(xué)媒介生物微量組織中免提取,直接擴(kuò)增DNA條形碼序列的方法。方法以螨、蚤、蜱單個(gè)個(gè)體以及小至蠅類后足1/5跗節(jié)的組織塊為材料,通過優(yōu)化裂解液濃度、裂解液和緩沖液配比,優(yōu)化反應(yīng)體系和反應(yīng)條件,用KOD FX DNA聚合酶進(jìn)行DNA條形碼序列的直接擴(kuò)增,反應(yīng)產(chǎn)物測(cè)序,與NCBI基因庫(kù)中的序列進(jìn)行比較以驗(yàn)證其是否被污染。結(jié)果裂解液優(yōu)化為NaOH 50 mmol/L;裂解液和緩沖液配比優(yōu)化為9∶1;反應(yīng)體積優(yōu)化為每50μl反應(yīng)體系中2×KOD FX DNA聚合酶buffer(含Mg2+)25μl、2 mmol/L dNTP 10μl、KOD FX DNA聚合酶(1 U/μl)1μl、正向引物L(fēng)CO1490(20μmol/L)、反向引物HCO2198(20μmol/L)各1μl;反應(yīng)條件優(yōu)化為:95℃3 min;98℃10 s,50℃30 s,68℃1 min,35個(gè)循環(huán);68℃7 min。測(cè)序結(jié)果顯示無(wú)污染,均為有效序列。結(jié)論該方法操作簡(jiǎn)單而且省去了DNA提取的步驟,節(jié)約了時(shí)間和費(fèi)用,適合螨、蚤、蜱單個(gè)個(gè)體以及小至蠅類后足1/5跗節(jié)的組織塊DNA條形碼序列的直接擴(kuò)增。
[Abstract]:Objective To establish a method for extracting DNA barcode sequences from biological micro - tissue of medical medium by optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions with KOD FX DNA polymerase , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , optimizing reaction conditions , optimizing reaction system and reaction conditions , and optimizing reaction conditions .

【作者單位】： 中山出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心;
【基金】：“十二五”國(guó)家科技支撐計(jì)劃課題(2012BAK11B05) 國(guó)家質(zhì)檢總局項(xiàng)目(2012IK223) 廣東出入境檢驗(yàn)檢疫局課題(2011GDK10,2013GDK36,2013GDK39) 中山市課題(20123A298)~~
【分類號(hào)】：R384

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 陳敘龍,張清敏,張毓琪,張寶東,陳素平;鯉魚肝胰臟線粒體DNA的分離、純化方法[J];環(huán)境化學(xué);1994年03期

2 周曉慧;DNA與免疫[J];承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1998年02期

3 張愛民,張建民;論基因組的分子進(jìn)化[J];菏澤師范專科學(xué)校學(xué)報(bào);1998年02期

4 房經(jīng)貴,章鎮(zhèn),劉大鈞,馬正強(qiáng),JossiHillel;一種從貯藏較久番茄葉中提取適于PCR擴(kuò)增的DNA的方法[J];植物生理學(xué)通訊;2000年01期

5 朱長(zhǎng)軍,張利寧,馬春紅,曹英林,宋靜;一種新型桿狀病毒親本株的鑒定及病毒DNA的純化[J];山東醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2000年01期

6 張秀花,弓巧娟;分子內(nèi)電荷轉(zhuǎn)移熒光探針DMAHF的介質(zhì)效應(yīng)及與DNA的作用[J];山西大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2000年01期

7 宗仁鶴,白春禮,李振剛,汪新文,聶焰,龔為穗,楊安慶,龔立三;激光對(duì)DNA作用機(jī)理的AFM研究[J];激光生物學(xué)報(bào);2001年01期

8 張李陽(yáng);固體發(fā)酵紅曲霉菌生物量測(cè)定方法的研究[J];南京曉莊學(xué)院學(xué)報(bào);2002年04期

9 徐治立;論基因科技的二重性[J];系統(tǒng)辯證學(xué)學(xué)報(bào);2002年03期

10 羅文永,陳建偉,劉彥卓,肖昕,毛興學(xué),李曉方;快速鑒定陽(yáng)性重組質(zhì)粒方法的改進(jìn)試驗(yàn)[J];廣東農(nóng)業(yè)科學(xué);2004年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 劉海英;陳剛;步宇翔;;堿基對(duì)的多銅修飾對(duì)DNA導(dǎo)電性的增強(qiáng)作用[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第28屆學(xué)術(shù)年會(huì)第13分會(huì)場(chǎng)摘要集[C];2012年

2 鄒丹丹;汪海林;;基于DNA甲基化結(jié)合蛋白MBD的甲基化分析[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第28屆學(xué)術(shù)年會(huì)第2分會(huì)場(chǎng)摘要集[C];2012年

3 邢永政;劉冬生;;ATP誘導(dǎo)的DNA突環(huán)結(jié)構(gòu)的打開及其對(duì)DNA鏈替換反應(yīng)的調(diào)控[A];2011年全國(guó)高分子學(xué)術(shù)論文報(bào)告會(huì)論文摘要集[C];2011年

4 程巳雪;陳思;趙東;卓仁禧;;不同DNA復(fù)合物在基質(zhì)介導(dǎo)基因傳遞中的性能[A];2011中國(guó)材料研討會(huì)論文摘要集[C];2011年

5 邢永政;楊忠強(qiáng);劉冬生;;一種配體結(jié)合調(diào)控的DNA鏈替換反應(yīng)體系的構(gòu)建[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第28屆學(xué)術(shù)年會(huì)第3分會(huì)場(chǎng)摘要集[C];2012年

6 周曉萍;肖鵬;呂雪飛;鄧玉林;;單鏈DNA的固定化技術(shù)研究[A];全國(guó)生物醫(yī)藥色譜學(xué)術(shù)交流會(huì)（2010景德鎮(zhèn)）論文集[C];2010年

7 張泉;蘇都莫日根;;線粒體DNA的數(shù)量調(diào)控與非孟德爾遺傳[A];中國(guó)植物學(xué)會(huì)植物細(xì)胞生物學(xué)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要匯編[C];2010年

8 趙元彪;胥慧;何群;;粗糙脈孢菌DNA甲基化調(diào)控機(jī)制[A];中國(guó)菌物學(xué)會(huì)第五屆會(huì)員代表大會(huì)暨2011年學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2011年

9 趙文杰;湯超;王彩娟;劉軍偉;盧奎;;β-胸苷與DNA相互作用[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第十二屆全國(guó)應(yīng)用化學(xué)年會(huì)論文集[C];2011年

10 鄒傳新;李洪林;;基于序列的蛋白質(zhì)-DNA相互作用分析與機(jī)器學(xué)習(xí)預(yù)測(cè)[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第28屆學(xué)術(shù)年會(huì)第14分會(huì)場(chǎng)摘要集[C];2012年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 劉霞;科學(xué)家研發(fā)出新型人工合成DNA載體[N];科技日?qǐng)?bào);2010年

2 常麗君;虱子DNA表明人類17萬(wàn)年前首次穿衣[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

3 記者 馮衛(wèi)東;DNA堿基序列決定其光敏性假設(shè)獲證實(shí)[N];科技日?qǐng)?bào);2008年

4 許文強(qiáng);拆、裝更便捷的DNA雙螺栓結(jié)構(gòu)模型[N];大眾科技報(bào);2008年

5 陳超;下一代DNA測(cè)序技術(shù)原理首次獲得驗(yàn)證[N];科技日?qǐng)?bào);2010年

6 本報(bào)記者 馮衛(wèi)東　聶翠蓉;“垃圾”DNA申請(qǐng)恢復(fù)名譽(yù)[N];科技日?qǐng)?bào);2008年

7 記者 劉霞;科學(xué)家發(fā)現(xiàn)可讓DNA重繞的馬達(dá)蛋白質(zhì)[N];科技日?qǐng)?bào);2008年

8 陳丹;石墨烯納米孔設(shè)備可探測(cè)單個(gè)DNA分子[N];科技日?qǐng)?bào);2010年

9 馮衛(wèi)東;美審計(jì)署稱DNA測(cè)試公司的結(jié)論可信度不高[N];科技日?qǐng)?bào);2010年

10 何屹;DNA可改變受體蛋白的結(jié)構(gòu)和功能[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 徐鐵剛;細(xì)菌DNA磷硫酰化修飾與限制[D];上海交通大學(xué);2008年

2 高鵬;特異性介導(dǎo)DNA轉(zhuǎn)導(dǎo)的多結(jié)構(gòu)域嵌合蛋白的構(gòu)建、表達(dá)及鑒定[D];吉林大學(xué);2011年

3 梅傳忠;PI3K/Akt信號(hào)通路對(duì)DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3B基因表達(dá)的調(diào)控及其分子機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

4 崔鵬;適用于DNA電荷輸運(yùn)研究的緊束縛模型方法[D];山東大學(xué);2010年

5 李敏;異翅亞目DNA條形碼，譜系生物地理學(xué)及花蝽科（狹義）分子系統(tǒng)發(fā)育研究[D];南開大學(xué);2010年

6 楊恩成;特異性多結(jié)構(gòu)域DNA轉(zhuǎn)導(dǎo)重組嵌合體在畢赤酵母中表達(dá)及其體內(nèi)外轉(zhuǎn)導(dǎo)作用[D];吉林大學(xué);2010年

7 郭爍;DNA信號(hào)序列分析的基因預(yù)測(cè)方法研究[D];大連海事大學(xué);2010年

8 張黎明;電磁輻射中低能電子誘導(dǎo)DNA直接損傷的理論研究[D];山東大學(xué);2010年

9 吳初新;魚類PKZ（Protein Kinase Containing Z-DNA Binding Domain）Zα與Z-DNA的結(jié)合[D];南昌大學(xué);2010年

10 趙魁;羊傳染性膿皰病毒重組DNA疫苗的構(gòu)建與實(shí)驗(yàn)免疫研究[D];吉林大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 侯美靈;DNA微陣列數(shù)據(jù)分析及蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)研究[D];中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué);2010年

2 喬柱;利用DNA長(zhǎng)度編碼實(shí)現(xiàn)分子計(jì)算[D];電子科技大學(xué);2010年

3 李金京;單鏈DNA結(jié)合蛋白與單鏈DNA相互作用的AFM研究[D];吉林大學(xué);2011年

4 李偉;DNA序列的圖形表示方法研究[D];蘭州大學(xué);2010年

5 李秦豫;野生塔里木馬鹿糞便DNA提取方法和性別鑒定研究[D];新疆大學(xué);2010年

6 馬英;DNA條形碼技術(shù)在青海省小型獸類及寄生蚤鑒定中的應(yīng)用研究[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2010年

7 李全義;DNA熒光生物傳感器的制備及水溶性量子點(diǎn)在DNA分析中的應(yīng)用研究[D];青島科技大學(xué);2010年

8 劉剛;普氏野馬糞便DNA方法優(yōu)化及應(yīng)用的可行性研究[D];北京林業(yè)大學(xué);2011年

9 吳文化;幾種鱘魚及雜交種DNA條形碼研究及分子鑒別[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

10 肖欣;緩步動(dòng)物的DNA條形編碼研究[D];陜西師范大學(xué);2010年

，

本文編號(hào)：1522997