上世紀(jì)90年代,世界范圍內(nèi)開始了干細(xì)胞的研究,干細(xì)胞所具有的增殖與分化特性受到越來越多研究者的關(guān)注。干細(xì)胞的研究目前不僅包括分離培養(yǎng)與增殖,而且誘導(dǎo)分化的研究以及臨床應(yīng)用正越來受到重視。本實(shí)驗(yàn)以雞真皮間充質(zhì)干／祖細(xì)胞(Dermis-derived Mesenchymal Stem/progenitor Cells,DMS/PCs)為研究對象,建立了合適的體外培養(yǎng)體系,并進(jìn)行了初步誘導(dǎo)分化方面的研究,取得了以下研究結(jié)果： 1、取16日齡雞胚的皮膚組織,用0.25%DispaseⅡ37℃熱消化1.5-2h,表皮層與真皮層分離,再用0.25%的胰酶消化15分鐘用獲得DMS/PCs,體外培養(yǎng)體系為：L-DMEM培養(yǎng)基,20ng/mL EGF,20ng/mL b EGF,2mM L-谷氨酰胺,1mM丙酮酸鈉。 2、北京油雞真皮間充質(zhì)干／祖細(xì)胞在體外自我更新能力很強(qiáng)。體外培養(yǎng)時呈長梭形。原代培養(yǎng)時細(xì)胞較為混雜,有血細(xì)胞及成纖維細(xì)胞,經(jīng)2-3次傳代后細(xì)胞可被初步純化。雞真皮間充質(zhì)干／祖細(xì)胞細(xì)胞的傳代間隔時間約為72h,在體外培養(yǎng)時可傳至16代。13代以內(nèi)的細(xì)胞形態(tài)和增殖能力較為穩(wěn)定,從第14代開始,...

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2Fig.23種培養(yǎng)體系對細(xì)胞增殆能力的比較

2.3.2北京油雞DMS/PCS培養(yǎng)體系的優(yōu)化通過一記錄3種培養(yǎng)體系細(xì)胞長滿培養(yǎng)板所需的時間，計(jì)算每組時間的標(biāo)準(zhǔn)差和每兩組之間的p值，得到了圖2的柱狀圖。傳代間隔時間10.008.00燕6·00袱4.002.000.00蘸2培養(yǎng)體系圖2Fig.23種培養(yǎng)體系對細(xì)胞增殆能力....

圖3傳代后DMs/Pes形態(tài)(40X)Fig.3eellularmo印hologyofsubeulturedDMs/Pes(4oX)

細(xì)胞基本都為長梭形細(xì)胞，得到了初步的純化，當(dāng)傳代至P14代后，細(xì)胞增殖能力減慢，并在細(xì)胞中出現(xiàn)了空泡化等現(xiàn)象，傳代后發(fā)現(xiàn)有大量死亡細(xì)胞，不能夠貼壁，共傳至16代。不同代次的細(xì)胞形態(tài)如圖3圖3傳代后DMs/Pes形態(tài)(40X)Fig.3eellularmo印hologyo....

圖4凍存前和復(fù)蘇后細(xì)胞形態(tài)A:凍存前細(xì)胞形態(tài)B:復(fù)蘇后細(xì)胞形態(tài)

Fig4CellularmorphologyofbeforefreezingandAfierthawingA:CellularmorphologyofbeforefreezingB:Celhilarmorphologyofafterthawing從圖4中可以看出，凍存前細(xì)....

圖6.北京油雞nMs用Cs表面標(biāo)志的Rl:pCR檢測eD29、CD44、cD7z、cD73Fig6R下PCRidentifieationofDMS/PCssurfaeemarkers，CD29、CD44、CD71、在P3和PS代均陽性表達(dá)CD73arePositiveinP3and

表面標(biāo)志的Rl:pCR檢測eD29、CD44、cD7z、cD73tionofDMS/PCssurfaeemarkers，CD29、CD44、CD71、在P3和PCD73arePPCs向脂肪細(xì)胞的誘導(dǎo)分化及鑒定肪誘導(dǎo)后1周，首先觀察到大部分長梭形細(xì)胞逐漸漿里出現(xiàn)折光性很強(qiáng)的脂滴，在....

本文編號：3920517