本文關鍵詞：木犀草素對化膿隱秘桿菌MATE基因抑制作用的研究　出處：《沈陽農(nóng)業(yè)大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

  更多相關文章： 化膿隱秘桿菌 主動外排系統(tǒng) 木犀草素 耐藥性 耐藥機制

【摘要】：化膿隱秘桿菌(Trueperellapyogenes)是一種可引起動物化膿性感染的重要病原菌,由于該菌耐藥性迅猛發(fā)展,已受到學者廣泛關注。主動外排系統(tǒng)的存在是導致細菌耐藥性產(chǎn)生的重要因素之一,現(xiàn)存外排泵抑制劑(EPIs)雖能消減菌體對抗菌藥的排出,卻因為劑量高、副作用大而在臨床應用中受到限制。本研究分析了化膿隱秘桿菌外排基因與其耐藥相關性,并探究木犀草素對該菌外排基因的影響,以期為木犀草素作為抗菌新藥的研發(fā)奠定基礎,對減少化膿隱秘桿菌耐藥性的產(chǎn)生具有重要意義。本研究通過分子生物學和生物信息學技術相結合的方法,對化膿隱秘桿菌MATE基因進行篩查;并對該基因所編碼蛋白質(zhì)的二級、三級結構及其保守結構域等進行預測分析。結果顯示,化膿隱秘桿菌分離株中MATE基因的攜帶率為94.12%(32/34),該基因共編碼436個氨基酸,相對分子量為44.94232 kD,理論等電點為10.05,總平均親水性指數(shù)(GRAVY)為0.873;該轉(zhuǎn)運蛋白最有可能分布于細胞膜上;不含信號肽序列、N-糖基化位點,含有12個跨膜區(qū)域、25個磷酸化位點;其二級結構是以α-螺旋為主的混合結構,含有2個保守結構域;未預測出較可靠的蛋白質(zhì)三維結構。采用微量肉湯稀釋法分別測定木犀草素和慶大霉素對34株化膿隱秘桿菌的最小抑菌濃度(MIC)。選取對慶大霉素耐藥的化膿隱秘桿菌,通過棋盤法測定兩種藥物聯(lián)合抑菌效果。經(jīng)亞抑菌濃度木犀草素作用耐藥菌株,比較木犀草素作用前后化膿隱秘桿菌對慶大霉素的耐藥性變化情況。結果表明,木犀草素對化膿隱秘桿菌的MIC值為39～156 μg/mL,與慶大霉素聯(lián)合的作用為不相關;耐藥菌經(jīng)亞抑菌濃度木犀草素(1/4MIC)作用36 h后,慶大霉素對耐藥菌的MIC值下降2～32倍,且原菌株耐藥水平越高,MIC下降倍數(shù)越高。提示木犀草素具有良好抗菌活性的體外抗菌活性,且能夠消減化膿隱秘桿菌耐藥性。選取8株攜帶MATE基因的耐慶大霉素化膿隱秘桿菌,通過熒光定量PCR擴增等方法,研究木犀草素對化膿隱秘桿菌MATE基因序列及其mRNA表達量的影響。結果發(fā)現(xiàn),經(jīng)亞抑菌濃度木犀草素(1/4MIC)作用后,對MATE基因的堿基序列沒有變化,但MATE基因mRNA表達量均下降,且隨著該基因mRNA表達量的下降,菌株MIC值亦呈下降趨勢,但傳代后變化趨勢不明顯。初步說明,木犀草素可能通過抑制化膿隱秘桿菌MATE基因mRNA的表達量而影響其耐藥性。本研究從外排基因入手,預測并分析化膿隱秘桿菌MATE基因與其耐藥相關性,探究木犀草素抑菌活性及其對化膿隱秘桿菌外排基因的影響,將對研究該菌耐藥機制及延緩該菌耐藥性的產(chǎn)生具有重要意義,同時為木犀草素作為新型抗菌藥物的研發(fā)奠定基礎。
【學位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S852.61

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