發(fā)布時(shí)間：2017-12-22 20:18

  本文關(guān)鍵詞：異黃酮在大豆抗胞囊線蟲(chóng)過(guò)程中的作用研究　出處：《沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：大豆胞囊線蟲(chóng)(Soybean cyst nematode,SCN)是世界上對(duì)大豆產(chǎn)生嚴(yán)重危害的重要病原物,我國(guó)主要是在東北和黃淮海大豆主產(chǎn)區(qū)嚴(yán)重發(fā)生。大豆異黃酮作為一類(lèi)重要的植保素,在大豆抗胞囊線蟲(chóng)過(guò)程中發(fā)揮重要作用,但是具體哪些種類(lèi)異黃酮起到多大作用則鮮見(jiàn)研究。因此,本研究在明確了6種大豆異黃酮對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)的生物活性基礎(chǔ)上,又利用ELISA和Real-time PCR方法測(cè)定了大豆異黃酮合成代謝途徑中查爾酮還原酶(CHR)、查爾酮合酶(CHS)和查爾酮異構(gòu)酶(CHI)的酶含量變化和基因表達(dá),從而探究根瘤菌Sneb183誘導(dǎo)過(guò)程中大豆異黃酮的表達(dá),明確大豆異黃酮在大豆抗胞囊線蟲(chóng)中的作用,為大豆線蟲(chóng)病害的防治提供新思路。結(jié)果如下:1.大豆異黃酮的不同種類(lèi)對(duì)胞囊線蟲(chóng)的生物活性研究:選取了黃豆苷元(Daidzein)、黃豆苷(Daidzin)、染料木素(Genistein)、染料木苷(Genistin)、黃豆黃苷(Glycitin)和黃豆黃素(Glycitein)6種大豆異黃酮,測(cè)定其不同濃度對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)的卵孵化和二齡幼蟲(chóng)J2的致死率及其田間防效,結(jié)果表明:6種大豆異黃酮對(duì)胞囊線蟲(chóng)均具有一定的抑制作用,其中100 μg/mL染料木素對(duì)胞囊線蟲(chóng)的抑制作用最強(qiáng),處理24 h和72 h后,對(duì)J2的校正死亡率分別為45.46%和56.86%;卵孵化的抑制率分別為43.48%和48.48%;且50 μg/mL染料木素處理種子后的田間防效顯示對(duì)胞囊抑制率亦達(dá)到49.47%。此外,染料木苷和黃豆苷元對(duì)J2和卵孵化也有較明顯效果,但田間防效較其他異黃酮差;黃豆黃苷和黃豆黃素對(duì)J2毒殺作用較弱但對(duì)卵孵化抑制作用較強(qiáng);黃豆苷對(duì)J2和卵孵化作用效果最弱,但是其田間防效與染料木素?zé)o顯著性差異。說(shuō)明供試的6種異黃酮在不同濃度和條件下均對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)有抑制作用,而染料木素的綜合效果最好。2.生物脅迫下大豆異黃酮關(guān)鍵酶基因的表達(dá)分析:采用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)與大豆異黃酮合成密切相關(guān)的3種關(guān)鍵酶基因在大豆根部的相對(duì)表達(dá),包括查爾酮還原酶基因CHR、查爾酮合酶基因CHS和查爾酮異構(gòu)酶基因CHI,這幾個(gè)基因主要調(diào)控染料木素和黃豆苷元的合成。研究發(fā)現(xiàn)在根瘤菌Sneb183誘導(dǎo)后再接種大豆胞囊線蟲(chóng)的處理中,處理前7 h,3個(gè)基因的相對(duì)表達(dá)量均顯著高于單獨(dú)接種線蟲(chóng)和根瘤菌的處理;其中單獨(dú)接種線蟲(chóng)的相對(duì)表達(dá)量略高于單獨(dú)接種根瘤菌,但是兩種處理差異不顯著。3.生物脅迫下大豆異黃酮關(guān)鍵酶的含量分析:采用ELISA酶聯(lián)免疫方法檢測(cè)與大豆異黃酮合成密切相關(guān)的3種關(guān)鍵酶活性,包括查爾酮還原酶CHR、查爾酮合酶CHS和查爾酮異構(gòu)酶CHI,單獨(dú)接種線蟲(chóng)和根瘤菌以及接種根瘤菌后再接種線蟲(chóng)的3種處理的CHR、CHS和CHI含量在整體水平上均高于空白對(duì)照。而根瘤菌Sneb183誘導(dǎo)后接種大豆胞囊線蟲(chóng)的處理8 h時(shí)的大豆根部3種關(guān)鍵酶的含量均最高,單獨(dú)接種線蟲(chóng)的處理次之,只接種根瘤菌Sneb183的處理3種酶含量最低。ELISA酶含量檢測(cè)結(jié)果與基因的表達(dá)分析結(jié)果一致。說(shuō)明根瘤菌Sneb183能夠誘導(dǎo)3種大豆異黃酮關(guān)鍵酶的表達(dá),但是需要受線蟲(chóng)侵染后的誘導(dǎo)表達(dá)量才能夠達(dá)到最大。本研究明確了對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)有活性的染料木素等大豆異黃酮種類(lèi),同時(shí)也揭示了大豆異黃酮的關(guān)鍵酶能夠被生物因子根瘤菌Sneb183和線蟲(chóng)誘導(dǎo)表達(dá)的科學(xué)現(xiàn)象。
【學(xué)位授予單位】：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：S435.651

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1320875