發(fā)布時間：2017-12-22 19:17

  本文關鍵詞：柞蠶滯育蛹解除滯育過程中糖含量變化及海藻糖合成酶基因的表達分析　出處：《沈陽農業(yè)大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

  更多相關文章： 柞蠶 滯育解除 糖含量變化 海藻糖合成酶基因克隆 表達分析 原核表達

【摘要】：柞蠶(Antheraea pernyi)屬于鱗翅目大蠶蛾科柞蠶屬的泌絲昆蟲,屬完全變態(tài)昆蟲,一生經歷卵、幼蟲、蛹和成蟲四個不同的生理階段,以蛹滯育的形式渡過惡劣的外界環(huán)境。研究柞蠶蛹滯育的解除,為實現(xiàn)柞蠶"一化二放"提供理論依據。選用沈陽農業(yè)大學遼寧省昆蟲資源工程技術研究中心保育的沈黃1號和河南省蠶業(yè)科學研究院保育的豫大1號為材料,研究光照解除柞蠶滯育蛹滯育方法、測定了柞蠶蛹海藻糖和糖原的含量、克隆了柞蠶海藻糖合成酶基因(ApTPS),并對該基因進行了生物信息學分析、組織表達譜分析、實時熒光定量、原核表達和Western Blot等研究,結果如下:1.柞蠶品種沈黃1號和豫大1號滯育蛹解除滯育研究結果表明,400 Lux、17L:7D的光照組合對豫大1號的滯育解除效果最好,校正羽化率為80%,羽化高峰出現(xiàn)較早;260 Lux、17 L:7 D的光照組合對沈黃1號的滯育解除效果較好,最高校正羽化率為89.9%;400 Lux、17 L:7D組合的羽化高峰期最早。熒光燈處理下,豫大1號的平均校正羽化率較沈黃1號低9.1%,羽化持續(xù)時間長19.16 d。2.柞蠶滯育蛹解除滯育期間海藻糖和糖原含量測定結果表明,豫大1號和沈黃1號的海藻糖含量在滯育解除過程中無明顯的變化規(guī)律,豫大1號在自然光處理期間糖原含量無明顯變化規(guī)律,在400 Lux、17 L:7D光照處理期間,糖原含量呈先下降后上升的趨勢,而沈黃1號的糖原含量在400 Lux、17 L:7 D光照和自然光光照處理下都呈持續(xù)下降的趨勢。3.克隆獲得了柞蠶海藻糖合成酶基因ApTPS(GenBank收錄號為KU977454),開放閱讀框ORF長2 487 bp,編碼828個氨基酸,推測其蛋白分子量為93.19 KDa,等電點(pI)4.61,無信號肽,無跨膜區(qū),蛋白質亞細胞定位預測該蛋白定位于細胞質中。蛋白質結構域分析表明,ApTPS有2個保守功能區(qū):TPS(第22-497位氨基酸)和TPP(第532-772位氨基酸)。4.采用半定量RT-PCR技術對柞蠶幼蟲各組織ApTPS基因特異性分析表明,ApTPS基因在柞蠶各組織中均有表達,其中脂肪體中表達量最高。采用實時熒光定量PCR技術檢測了柞蠶蛹解除滯育過程的ApTPS基因表達量,ApTPS基因在脂肪體和血淋巴中的表達量均有所升高且顯著高于對照組(P0.05),血淋巴中表達量的升高滯后于脂肪體。5.以pET-28a為質粒,設計引物構建ApTPS基因原核表達載體,對表達的目的蛋白進行了純化,制備了抗體和Western blot等驗證,結果表明ApTPS基因原核表達重組載體構建成功,通過對柞蠶蛹滯育解除期間脂肪體ApTPS的Western Blot分析,結果與實時定量PCR的結果一致,都呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢。
【學位授予單位】：沈陽農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S885.1

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本文編號：1320684