發(fā)布時間：2016-12-31 14:44

  本文關(guān)鍵詞：RNAi沉默PTTG1對人膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)行為及化療敏感性的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

博士學(xué)位論文；（７）細(xì)胞凋亡百分率＝Ｂ２象限＋Ｂ４象限細(xì)胞凋亡；１．２．７干擾ＰＴＴＧｌ對膠質(zhì)瘤細(xì)胞Ｐ１３１ｄＡ；取生長狀態(tài)良好的膠質(zhì)瘤細(xì)胞ＬＮ．２２９和Ｕ３７３；過表達(dá)質(zhì)粒和ＰＴＴＧｌｓｉＲＮＡ質(zhì)粒，４８小時后；ＰＴＴＧｌ；４組，通過Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ方法分別檢測Ｐ１；達(dá)，方法同第一部分；１．３統(tǒng)計(jì)學(xué)分析；數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ｉ±Ｓ）表示；分析，數(shù)據(jù)服

博士學(xué)位論文

（７）細(xì)胞凋亡百分率＝Ｂ２象限＋Ｂ４象限細(xì)胞凋亡率。

１．２．７干擾ＰＴＴＧｌ對膠質(zhì)瘤細(xì)胞Ｐ１３１ｄＡＫＴ信號通路的影響

取生長狀態(tài)良好的膠質(zhì)瘤細(xì)胞ＬＮ．２２９和Ｕ３７３，用ｌｉｐｏ．２０００分別轉(zhuǎn)染ＰＴＴＧｌ

過表達(dá)質(zhì)粒和ＰＴＴＧｌｓｉＲＮＡ質(zhì)粒，４８小時后，分為Ｖｅｃｔｏｒ、ＰＴＴＧｌ、Ｓｃｒａｍｂｌｅ、Ｓｉ

ＰＴＴＧｌ

４組，通過Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ方法分別檢測Ｐ１３Ｋ、ｐ－Ｐ１３Ｋ，Ａｋｔ、ｐ－Ａｋｔ蛋白的表

達(dá)，方法同第一部分。

１．３統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ｉ±Ｓ）表示。采用ＳＰＳＳ２１．０統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行

分析，數(shù)據(jù)服從正態(tài)分布，兩組間數(shù)據(jù)用獨(dú)立樣本ｔ檢驗(yàn)方法，兩組以上數(shù)據(jù)

比較用單因素方差分析，若數(shù)據(jù)不服從正態(tài)分布，用秩合檢驗(yàn)比較，Ｐ＜０．０５認(rèn)

為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

２．結(jié)果

２．１ＰＴＴＧｌ

ｓｉＲＮＡ協(xié)同替莫唑胺抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖

采用ＭＴＴ實(shí)驗(yàn)檢測各組細(xì)胞生長曲線，結(jié)果顯示與未加入替莫唑胺的Ｕ３７３組相比，替莫唑胺使膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長受到明顯抑制，并且隨著藥物劑量的增加，

抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長的作用更加明顯，當(dāng)替莫唑胺的終濃達(dá)到４００１ａｍｏｌ／Ｌ作用時間為４８ｈ時，對細(xì)胞生長的抑制作用最明顯（Ｆ＝８．８１１，Ｐ＝０．００６），，詳見圖３－１ａ，表３．１ａ，為我們后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供藥物最佳濃度及作用時間。

在圖３．１ｂ結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染ＰＴＴＧｌｓｉＲＮＡ質(zhì)粒的Ｕ３７３細(xì)胞組和加入

４００１ｘｒｎｏｌ／Ｌ替莫唑胺細(xì)胞組的增殖能力均較對照Ｓｃｒａｍｂｌｅ組低，并且ＰＴＴＧｌ

ｓｉＲＮＡ質(zhì)粒與替莫唑胺聯(lián)合可進(jìn)一步抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖。

４７

第三部分ＰＴＴＧｌ在膠質(zhì)瘤細(xì)胞對替莫唑胺化療敏感性的作用及機(jī)制

①３

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圖３．１ａ不同濃度替莫唑胺對膠質(zhì)瘤細(xì)胞增值的影響

Ｆｉｇ３－ｌａＡｂｓｏｒｂａｎｃｅｖａｌｕｅｏｆＵ３７３ｃｅｌｌｓｗｅｒｅ打ｅａｔｅｄｗｉｔｌｌ０，１００，２００，４００ｇｍｏｌ／Ｌ

ＴＭＺ

表３．１ａ不同濃度替莫唑胺對膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的影響

。：ＶＳＵ３７３Ｐ《０．０５

博士學(xué)位論文

ａ）１ｈ

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圖３．１ｂ

ＰＴＴＧｌ

４８ｈ７２ｈ

ｓｉＲＮＡ質(zhì)粒協(xié)同替莫唑胺抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增值

Ｆｉｇ．３一ｌｂＴｈｅｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｅｆｆｅｃｔｏｆＵ３７３ｃｅｌｌｉｎＰＴＴＧｌｓｉＲＮＡｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈＴＭＺｇｒｏｕｐ

表３．１ｂ

ＰＴＴＧｌ

ｓｉＲＮＡ協(xié)同替莫唑胺抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖

‘：ＶＳＳｃｒａｍｂｌｅＰ＜００５

２．２ＰＴＴＧＩ

ｓｉＲＮＡ協(xié)同替莫唑胺促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的凋亡

流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡顯示與ｓｃｒａｍｂｌｅ組比較，應(yīng)用替莫唑胺組及ＰＴＴＧｌｓｉＲＮＡ組細(xì)胞凋亡增加，而ＰＴＴＧｌｓｉＲＮＡ＋ＴＭＺ組比ＰＴＴＧｌｓｉＲＮＡ組及ＴＭＺ

４９

第三部分ＰＴＴＧｌ在膠質(zhì)瘤細(xì)胞對替莫唑胺化療敏感性的作用及機(jī)制

組促進(jìn)細(xì)胞凋亡作用更加明顯，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｆ＝７１．９５２，Ｐ＜０．００１）（圖３—２，表３。２）。結(jié)果提示ＰＴＴＧｌｓｉＲＮＡ可以顯著誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的凋亡，且可增加膠質(zhì)瘤細(xì)胞對化療藥物的敏感性。

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Ａ．ＳｃｒａｍｂｌｅＢ．ＴＭＺＣ．ＳｉＰＴｒＧｌＤ．ＳｉＰＴＴＧｌ＋ＴＭＺ

圖３．２

ＰＴＴＧｌ

ＳｉＲＮＡ對膠質(zhì)瘤細(xì)胞Ｕ３７３凋亡的影響

ｏｎ

Ｆｉｇ．３—２ＦＣＭｐｉｃｔｕｒｅｓｏｆＰＴＴＧｓｉＲＮＡｐｌａｓｍｉｄＵ３７３ｃｅｌｌａｐｏｐｔｏｓｉｓ

表３—２

ＰＴＴＧｌ

ｓｉＲＮＡ對膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡的影響

＋ｖｓＳｃｒａｍｂｌｅ：＃：ＳｊＰｌ－１Ｇ１＋ＴＭＺｖｓＴＭＺ：￥：ＳｉＰＴＩ－Ｇ１＋ＴＭＺｖｓＰＴＴＧｌＰ＜００５

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博士學(xué)位論文

２．３ＰＴＴＧ１

ｓｉＲＮＡ對膠質(zhì)瘤細(xì)胞Ｐ１３Ｋ／ＡＫＴ信號通路的影響

結(jié)果表明，轉(zhuǎn)染了ＰＴＴＧｌ過表達(dá)質(zhì)粒的膠質(zhì)瘤細(xì)胞ＬＮ．２２９中ｐ－Ｐ１３Ｋ和

ｐ－ＡＫＴ表達(dá)較ｖｅｃｔｏｒ組明顯增加，而在膠質(zhì)瘤細(xì)胞Ｕ３７３中轉(zhuǎn)染ＰＴＴＧｌ干擾質(zhì)

粒后ｐ－Ｐ１３Ｋ和ｐ－Ａｋｔ表達(dá)量明顯下降，結(jié)果說明通過下調(diào)ＰＴＴＧｌ的表達(dá)，可以明顯抑制ｐ－Ｐ１３Ｋ和ｐ－Ａｋｔ表達(dá)水平，而對Ｐ１３Ｋ和Ａｋｔ表達(dá)水平無明顯影響，結(jié)果見圖３．３。

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圖３．３ＰＴＴＧｌ對膠質(zhì)瘤細(xì)胞Ｐ１３Ｋ／ＡＫＴ信號通路的影響

Ｆｉ９３－３ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＰＴＴＧ１

Ｐ１３Ｋ、ＡＫＴｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄＰ１３Ｋ、ＡＫＴｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎｉｎ

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５１

　

　

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