目的1.體外對人小涎腺上皮干/祖細胞(hMSG-EpiPCs)進行成肝誘導,鑒定誘導獲得細胞的表型和檢測其是否具有成熟肝臟細胞相關功能。2.移植hMSG-EpiPCs給急性肝損傷模型小鼠,鑒定其對小鼠急性肝功能損傷的修復能力,評估移植細胞成活率及肝內(nèi)轉歸。方法1.利用組織塊貼壁法從人小涎腺組織中分離培養(yǎng)出上皮干/祖細胞,體外傳代擴增培養(yǎng)。利用免疫熒光和流式細胞術鑒定其干細胞表型和特異性標記物。體外Matrigel構建三維培養(yǎng)環(huán)境下對hMSG-EpiPCs進行成肝誘導并設立空白對照組。利用免疫熒光及Real-time PCR檢測誘導而來的細胞相關肝臟細胞表型表達,并通過PAS染色、ICG攝取和CYP450功能測定檢測其相關成熟肝臟細胞功能。2.使用CM-Dil熒光標記hMSG-EpiPCs并觀察標記后細胞生長情況。建立聯(lián)合免疫缺陷(SCID/Beige)小鼠20%CC14腹腔注射急性肝損傷模型,隨機分為兩組:實驗組移植hMSG-EpiPCs(n=12),對照組注射PBS(n=12),另取正常SCID小鼠作為空白對照組(n=3)。術后觀察小鼠體重變化。并于移植后1天、3天、1周及2周分別取...

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1-1hMSCrEpiPCs原代及傳代培養(yǎng)

ａ?ｈＭＳＧ－ＥｐｉＰＣｓ原代培養(yǎng)；ｂ?ｈＭＳＧ－ＥｐｉＰＣｓ傳至Ｐ３獲得形態(tài)均一細胞；ｈＭＳＧ－ＥｐｉＰＣｓ傳至Ｐ２５出現(xiàn)衰老細胞??－ＨＩ?ｆｆ??０?？，?Ｋ４?Ｖ?０?Ｗ＊?？？，?＾?？?１０＊?？？，?ｗ４??￥ｍｉＡ?ｍｍ?ｔｔｔｒ－Ａ?ｒｒｍ＊?ｍ－ａ?ｍ??ｊ：....

圖１－２?ｈＭＳＧ－ＥｐｉＰＣｓ流式細胞學檢測結果??

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圖1-4hE}SCr-EpiPC:體外成肝誘導

ｍｍａ—■??圖１－３?ｈＭＳＧ－ＥｐｉＰＣｓ免疫熒光??紅色及綠色示陽性染色，藍色示ＤＡＰＩ染核，標尺見右下角??

圖1-3hMSCrEpiPCs免疫熒光紅色及綠色示陽性染色，藍色示DAPI染核，標尺見右下角

■■■■??圖１－４?ｈＭＳＧ－ＥｐｉＰＣｓ體外成肝誘導??誘導初期，細胞狀態(tài)好，逐漸生長聚集成細胞球；后期隨細胞誘導成熟，增殖能??力下降，出現(xiàn)壞死細胞碎片??

本文編號：3995975