發(fā)布時間：2016-12-23 15:10

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《昆明醫(yī)科大學(xué)》 2015年

動態(tài)灌注與靜態(tài)保存對犬離體肺保護作用的對比研究

孫相華  

【摘要】：背景肺移植是治療晚期肺實質(zhì)及肺血管疾病的唯一有效方法,近幾年的發(fā)展異常迅速,無論是單、雙肺移植還是心肺移植,均已獲得臨床成功,并且越來越受到人們的關(guān)注。成功的肺移植必然要解決供肺保存的質(zhì)量問題,保存方法的優(yōu)劣和保存時間的長短對肺組織的結(jié)構(gòu)和功能有重要的影響。目前臨床上公認(rèn)的離體肺保存時間最好在4小時以內(nèi),保存方法為肺循環(huán)灌注后的單存低溫保存。離體肺在保存過程中是具有活力的組織,肺組織的能量代謝仍然在進行,但其能量代謝物質(zhì)來源卻中斷了,雖然常用肺保存方法中都有肺灌注,但僅僅局限于肺保存早期,離體肺灌注完成后,僅限于低溫保存,限制了離體肺獲取代謝能量,不利于較長時間的肺保存。離體肺灌注技術(shù)長期以來都是臨床和實驗研究的重點,國內(nèi)外許多學(xué)者對逆向灌注、預(yù)處理、后期再灌注、支氣管動脈再通技術(shù)進行了大量研究。目前關(guān)于離體肺損傷的研究都沒有取得突破性進展,缺乏一種簡便高效的保護策略,肺保存面臨的問題和局限性日益突出。目的本研究通過比較動態(tài)灌注(體外循環(huán)機持續(xù)灌注與間斷壓力灌注)和靜態(tài)保存(低溫保存)對離體肺保護作用,探討離體肺損傷的機制,闡明模擬肺循環(huán)和心臟機械灌注的優(yōu)越性。方法1.將30只Mongrel犬隨機分成3組,在保持機械通氣的條件下,完整摘取雙肺。進行體外循環(huán)機持續(xù)灌注、間斷壓力灌注、單存灌注離體肺循環(huán)后低溫浸泡保存,并按時間點留取并保存標(biāo)本。2.采用HE染色法觀察犬離體肺組織病理改變,免疫組化法和蛋白質(zhì)印跡法檢測犬離體肺組織AQP1的表達。3.采用酶消化法分離并培養(yǎng)犬肺微血管內(nèi)皮細胞,顯微鏡觀察肺微血管內(nèi)皮細胞的形態(tài),免疫熒光染色鑒定肺微血管內(nèi)皮細胞。4.將培養(yǎng)的犬肺微血管內(nèi)皮細胞隨機分成三組,分別為模擬體外循環(huán)組、模擬壓力灌注組和模擬低溫保存組,n=10。利用CCK-8法檢測犬肺微血管內(nèi)皮細胞活性、Transwell法檢測犬肺微血管內(nèi)皮細胞遷移能力、Rhodamine 123染色檢測犬肺微血管內(nèi)皮細胞線粒體膜電位、硝酸還原酶法定量測定各組細胞保存液NO的濃度、ELISA法定量測定各組細胞保存液ET-1的濃度以及Western blot測定各組細胞VEGF的表達量。結(jié)果1.HE染色發(fā)現(xiàn),隨著離體時間的延長,肺泡組織結(jié)構(gòu)逐漸塌陷,炎性細胞及滲出增多,肺泡間隔也逐漸增寬,肺泡腔內(nèi)可見滲出物。三組之間比較,體外循環(huán)組的肺組織結(jié)構(gòu)損傷變化較輕,壓力灌注組次之,低溫保存組最嚴(yán)重。免疫組化檢測AQP1結(jié)果：各實驗組內(nèi)0h-2h AQP1變化無差異,p0.05,2h-8h AQP1的表達量呈下降趨勢,變化顯著,p0.05；在lh-2h每個時間點上,各組間AQP1變化無差異,p0.05,3h-8h每個時間點上,各組間AQP1變化差異顯著,體外循環(huán)組AQP1蛋白的表達量高于壓力灌注組,壓力灌注組又高于低溫保存組,p0.05。Western blot檢測AQP1結(jié)果：在各實驗組內(nèi),0h-3h AQP1變化無差異,p0.05; 3h-8h AQP1的表達量呈下降趨勢,變化顯著,p0.05；在lh-3h每個時間點上,各組間AQP1變化無差異,p0.05；在4h-8h每個時間點上,各組間AQP1變化差異顯著,體外循環(huán)組AQP1蛋白的表達量高于壓力灌注組,壓力灌注組又高于低溫保存組,p0.05。2.酶消化法分離并培養(yǎng)犬肺微血管內(nèi)皮細胞,此方法成功率高,費用適中,重復(fù)性較好。①各組內(nèi),0h-3h肺微血管內(nèi)皮細胞活性變化不顯著,p0.05；3h-8h肺微血管內(nèi)皮細胞活性隨著時間的延長呈逐漸降低,p0.05。在0h-3h的每個時間點上,各組間肺微血管內(nèi)皮細胞活性變化不顯著,p0.05；但在4h-8h的每個時間點上,低溫保存組細胞活性低于壓力灌注組,而壓力灌注組低于體外循環(huán)組,p0.05。②各組內(nèi),0h-5h進入到微孔膜下層的細胞數(shù)目差異不顯著,p0.05；5h-8h細胞數(shù)目顯著減少,p0.05；在0h-4h每個時間點上,各組間肺微血管內(nèi)皮細胞進入到微孔膜下層的細胞數(shù)目變化不顯著,p0.05；但在5h-8h每個時間點上,各組細胞數(shù)目變化顯著,其中體外循環(huán)組肺微血管內(nèi)皮細胞數(shù)目在每個時間點上均高于壓力灌注組,而壓力灌注均高于低溫保存組,p0.05。③在各組內(nèi),肺微血管內(nèi)皮細胞線粒體膜電位總體趨勢是逐漸下降的(0h-3h、p0.05,3h-8h、p0.05);在各組間,在0h-3h每個時間點上,肺微血管內(nèi)皮細胞線粒體膜電位無顯著變化,p0.05,在4h-8h每個時間點,肺微血管內(nèi)皮細胞線粒體膜電位呈現(xiàn)下降趨勢,體外循環(huán)組高于壓力灌注組,而壓力灌注組又高于低溫保存組,p0.05。④犬肺微血管內(nèi)皮細胞保存液NO的濃度在保存起始階段呈逐漸升高的趨勢,但模擬體外循環(huán)組在6小時達到高峰,而模擬壓力灌注組和低溫保存組在4-5小時就已達到峰值,之后各組均呈下降趨勢；在0h-3h,每個時間點保存液中NO的濃度進行組間比較(p0.05)未見明顯差異,在4h-8h,體外循環(huán)組高于壓力灌注組,而壓力灌注組又高于低溫保存組,差異顯著(p0.05)。⑤犬肺微血管內(nèi)皮細胞保存液ET-1的濃度呈逐漸升高的趨勢,但模擬體外循環(huán)組升高的幅度小于模擬壓力灌注組和低溫保存組。在0h-3h,每個時間點保存液中ET-1的濃度進行組間比較(p0.05)未見明顯差異,在4h-8h,體外循環(huán)組低于壓力灌注組,而壓力灌注組又低于低溫保存組,差異顯著(p0.05)。⑥在每種保存方式下,VEGF在離體肺組織中的表達隨著時間的延長呈逐漸上調(diào)的趨勢,0h-3h差異不顯著,p0.05,在3h-8h,差異顯著,p0.05。在lh-3h各個時間點下,各組間肺微血管內(nèi)皮細胞中VEGF基因的表達量無顯著差異,p0.05；而在4h-8h各個時間點下,各組間肺微血管內(nèi)皮細胞中VEGF基因的表達量差異顯著,低溫保存組VEGF基因的表達量顯著高于壓力灌注組,壓力灌注組又顯著高于體外循環(huán)組,p0.05。結(jié)論動態(tài)灌注對離體肺的保護作用顯著優(yōu)于靜態(tài)保存,其中體外循環(huán)機持續(xù)灌注對離體肺的保護作用又優(yōu)于間斷壓力灌注。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R655.3
【目錄】：

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【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 張國報,喬晨暉,曹勸省,孔國強,崔健峰,安卓翌,焦瑞娟;肺動脈和支氣管動脈雙循環(huán)沖洗在供肺保存中的作用[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2005年05期

2 楊國儀;陳靜瑜;夏鈺弘;虞敏紅;洪建剛;吳波;姜少軍;周曉軍;;棉子糖低鉀右旋糖酐液供體肺灌注保存的臨床病理學(xué)研究[J];臨床與實驗病理學(xué)雜志;2007年02期

3 周成斌;張鏡方;肖營凱;章曉華;肖學(xué)鈞;祁周措;;體外循環(huán)中低流量肺動脈灌注對肺功能的影響[J];中山大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)科學(xué)版);2006年03期

4 李玉梅;戴春來;李恒;嚴(yán)超英;;水通道蛋白與肺水腫關(guān)系的研究進展[J];中國實驗診斷學(xué);2010年10期

5 ;Protective effect of nitric oxide on hepatopulmonary syndrome from ischemia-reperfusion injury[J];World Journal of Gastroenterology;2012年25期

6 洪文娟;黃韜;洪志鵬;張璟;尹小川;太祥;熊國盛;趙煒;楊學(xué)慶;晉德光;;保護性有氧肺膨脹與移植肺保護形態(tài)學(xué)的研究[J];中華肺部疾病雜志(電子版);2012年05期

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張真榕;劉德若;;肺移植供肺保存技術(shù)的進展[J];北京醫(yī)學(xué);2007年05期

2 梁朝陽;劉德若;;肺移植器官灌注保存液的研究進展[J];北京醫(yī)學(xué);2010年11期

3 李碧云;李晶;景志敏;;肝肺綜合征發(fā)病機制的研究進展[J];重慶醫(yī)學(xué);2013年28期

4 肖穎琨;李天遠;曾慶詩;簡小敏;佘守章;;烏司他丁對單肺通氣和體外循環(huán)下行胸腔鏡心臟手術(shù)患者肺功能的影響[J];廣東醫(yī)學(xué);2015年06期

5 劉毅;梅榮;楊明會;李紹旦;王文明;;黃芪對急性肺損傷模型大鼠肺組織水通道蛋白-1和水通道蛋白-5表達的影響[J];環(huán)球中醫(yī)藥;2012年09期

6 高培顯;宋毅;谷興華;王濤;張希全;吳樹明;;肺動脈灌注含腺苷的冷氧合血對體外循環(huán)術(shù)后肺損傷的臨床研究[J];山東大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2007年05期

7 梁朝陽;張海濤;王在永;鮑彤;張真榕;劉德若;;自制低鉀右旋糖苷改良液用于保存犬肺移植離體肺的最長時間[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2010年53期

8 王振興;衛(wèi)棟;陳靜瑜;;棉籽糖低鉀右旋糖苷液對大鼠離體肺的保護作用[J];江蘇醫(yī)藥;2012年02期

9 孫相華;洪志鵬;;肺移植供肺保存的現(xiàn)狀與進展[J];中華肺部疾病雜志(電子版);2012年02期

10 魯建軍;姚達;秦存?zhèn)?張偉;羅紅鶴;鐘佛添;巫國勇;;缺血后處理對犬肺移植術(shù)后早期炎癥反應(yīng)的影響[J];中山大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)科學(xué)版);2009年05期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 孫振濤;降鈣素基因相關(guān)肽基因?qū)�入對腦死亡大鼠的肺保護作用[D];鄭州大學(xué);2012年

2 王文明;益氣活血中藥防治急性肺損傷作用機制研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 韓明;改良超濾對體外循環(huán)犬肺水通道蛋白1表達的影響[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2011年

2 高培顯;肺動脈灌注含腺苷的低溫氧合血對體外循環(huán)術(shù)后肺損傷保護作用的臨床研究[D];山東大學(xué);2007年

3 梁朝陽;改良自制低鉀右旋糖苷液用于犬肺移植肺保存質(zhì)量的觀察[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

4 高瑞;依達拉奉對大鼠肺移植缺血再灌注損傷保護作用的實驗研究[D];蘇州大學(xué);2009年

5 孫德峰;東莨菪堿預(yù)處理對大鼠肝臟缺血再灌注損傷的實驗研究[D];大理學(xué)院;2013年

6 申東方;脾臟缺血預(yù)處理對大鼠肝臟缺血再灌注損傷的保護作用[D];鄭州大學(xué);2014年

【二級參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 穆魁敏,劉秉錕,燕生,穆魁津;肺表面活性物質(zhì)的檢測[J];北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;1990年05期

2 刁同進,李又林,趙曉東,李冬梅,姚曉平,楊甲梅,吳孟超;一氧化氮在大鼠異種肝移植急性排異中的作用及其黃遞酶組化研究[J];肝膽胰外科雜志;2000年04期

3 ;Apoptosis in acute rejection of hamster-to-rat liver transplantation[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2002年03期

4 刁同進,鄧立華,李冬梅,姚曉平,楊甲梅,吳孟超;一氧化氮途徑在大鼠肝移植缺血再灌注損傷中的作用[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2000年01期

5 蔣進軍;白春學(xué);宋元林;;水通道蛋白1基因敲除對胸腔液體轉(zhuǎn)運的影響[J];中國臨床醫(yī)學(xué);2008年01期

6 張宏偉,陳景寒,俞麗敏;肺移植術(shù)的供肺保存研究現(xiàn)狀[J];山東醫(yī)藥;2003年33期

7 張成;王廣發(fā);湯秀英;李楓;唐巖;顧江;;嚴(yán)重急性呼吸綜合征肺水通道蛋白1表達的研究[J];中國實用內(nèi)科雜志;2009年07期

8 王玫;肺移植實驗供肺摘取配合及保養(yǎng)[J];現(xiàn)代醫(yī)院;2005年10期

9 張志泰,陳玉平;肺移植發(fā)展史及近況[J];心肺血管病雜志;2000年01期

10 刁同進,李偉華,吳孟超,姚曉平,楊甲梅,李冬梅,季兵,李風(fēng)池;大鼠異種原位肝移植急性排斥反應(yīng)中一氧化氮合酶細胞定位的意義[J];世界華人消化雜志;1999年10期

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉景漢,王青梅,李錫金,石群,駱群,韓瑋,歐陽錫林,高大勇;低溫保存血小板臨床應(yīng)用效應(yīng)研究[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2001年03期

2 王奇鳳,華澤釗,劉錦紛;細胞組織低溫保存中污染和微斷裂的防止[J];制冷學(xué)報;2002年02期

3 周國燕,徐紅艷,華澤釗,黃惠民,丁文祥;血管低溫保存的實驗研究[J];中國生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)報;2002年01期

4 于洋,劉景漢;低溫保存血小板基礎(chǔ)與應(yīng)用研究進展[J];中國輸血雜志;2003年06期

5 雷冬,趙建華,田利安;血管低溫保存全過程的熱應(yīng)力分析[J];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)學(xué)報;2004年03期

6 李錫金,馬曙軒,劉景漢,孫桂香,歐陽錫林;低溫保存血小板的制備與質(zhì)控效果的觀察[J];中國實驗血液學(xué)雜志;2004年04期

7 李聚林;何偉蘭;陳興智;;二甲基亞砜低溫保存血小板臨床應(yīng)用效果研究[J];廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2006年01期

8 趙剛;程曙霞;劉忠;;血管低溫保存過程熱應(yīng)力[J];化工學(xué)報;2006年06期

9 杜克清;吳緒華;李豐敏;盧發(fā)強;;164例患者輸注低溫保存血小板臨床療效分析[J];中國醫(yī)師雜志;2006年07期

10 張紹志;陳光明;;軟骨的低溫保存／移植研究進展[J];生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志;2007年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 高志新;郝保同;劉寶林;戎森杰;王欣;周國燕;;動脈血管低溫保存的研究進展[A];第六屆全國低溫生物醫(yī)學(xué)及器械學(xué)術(shù)大會論文集[C];2009年

2 徐紅艷;華澤釗;張征鴻;;血管低溫保存的初步研究[A];上海市制冷學(xué)會一九九九年學(xué)術(shù)年會論文集[C];1999年

3 馬恩普;劉秀珍;韓穎;;人新鮮血液低溫保存研究進展[A];中國輸血1999年年會暨紀(jì)念A(yù)BO血型發(fā)現(xiàn)100周年學(xué)術(shù)交流論文專輯[C];1999年

4 趙剛;雷東;王沛濤;龔明;程曙霞;;低溫保存對動脈粘彈性的影響[A];第五屆全國低溫生物醫(yī)學(xué)及器械學(xué)術(shù)大會會議論文集[C];2006年

5 胥義;鐘彥騫;趙曉剛;呂婭;王麗萍;劉寶林;;無心跳供體肺原位低溫保存及移植的研究進展[A];第七屆全國低溫生物醫(yī)學(xué)及器械學(xué)術(shù)大會論文集[C];2010年

6 華澤釗;;低溫保存與冷凍干燥[A];第五屆全國低溫生物醫(yī)學(xué)及器械學(xué)術(shù)大會會議論文集[C];2006年

7 于瑜;賈曉明;;細胞連接和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)在低溫保存皮膚方面的研究[A];第五屆全國低溫生物醫(yī)學(xué)及器械學(xué)術(shù)大會會議論文集[C];2006年

8 顧琦琚;韓穎穎;Ganesh;劉寶林;;羅莎綠種子的生長與低溫保存研究[A];上海市制冷學(xué)會2013年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2013年

9 徐紅艷;華澤釗;張征鴻;;血管低溫保存的初步研究[A];第四屆全國低溫工程學(xué)術(shù)會議論文集[C];1999年

10 王愛民;周國燕;;寄生蟲低溫保存的研究現(xiàn)狀[A];第七屆全國低溫生物醫(yī)學(xué)及器械學(xué)術(shù)大會論文集[C];2010年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 錢勇 韓瑋;[N];科技日報;2001年

2 通訊員 周煒 朱海洋 記者 潘劍凱;[N];光明日報;2013年

3 ;[N];湖北日報;2004年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 孫相華;動態(tài)灌注與靜態(tài)保存對犬離體肺保護作用的對比研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2015年

2 戴靜;微型化生物人工肝的低溫保存及傳質(zhì)研究[D];浙江大學(xué);2011年

3 周曉明;生物材料低溫保存中若干機械工程問題的理論和實驗研究[D];電子科技大學(xué);2010年

4 劉洋;骨髓間充質(zhì)干細胞及成骨細胞低溫保存的研究[D];大連理工大學(xué);2010年

5 翁林崠;細胞低溫保存跨膜傳質(zhì)機理及保護劑溶液凍結(jié)特性研究[D];大連理工大學(xué);2012年

6 高文波;超極化心臟保存液對大鼠心臟單純低溫保存的實驗研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2006年

7 李慶勇;零下非結(jié)冰保存人工肝用永生化肝細胞[D];南方醫(yī)科大學(xué);2011年

8 張紹志;臍帶血干細胞低溫保存的理論和實驗研究[D];浙江大學(xué);2003年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 侯書健;不同方法低溫保存復(fù)合組織的研究[D];青島大學(xué);2003年

2 張保;降溫速率對程序化降溫低溫保存動脈的影響的初步研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2008年

3 江玉華;海藻糖對胸骨低溫保存的保護作用及其機制的初步研究[D];青島大學(xué);2011年

4 袁媛;低溫保存對血小板凋亡的影響[D];蚌埠醫(yī)學(xué)院;2014年

5 丁來福;角膜低溫保存過程的研究[D];大連理工大學(xué);2007年

6 潘廣生;工程骨低溫保存中CPA的導(dǎo)入過程研究[D];大連理工大學(xué);2007年

7 楊鵬飛;人胚胎干細胞低溫保存問題的初步研究[D];上海理工大學(xué);2005年

8 李書華;泡姜低溫保存中主要營養(yǎng)物質(zhì)和微生物區(qū)系的研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

9 孟妍;包埋—脫水法常溫和低溫保存綠色巴夫藻[D];遼寧師范大學(xué);2008年

10 蔡宏;細胞骨架在皮膚低溫損傷中的重要作用及低溫保護劑的相關(guān)研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學(xué)院;2005年

  本文關(guān)鍵詞：動態(tài)灌注與靜態(tài)保存對犬離體肺保護作用的對比研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：224852