發(fā)布時間：2018-01-13 23:11

  本文關鍵詞：聚合物修飾的葉酸靶向磁性納米傳遞系統(tǒng)的制備及其對鼻咽癌的抑制和成像作用　出處：《南方醫(yī)科大學》2017年博士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)為我國南方地區(qū)常見的轉移性惡性腫瘤。放療是鼻咽癌各個分期的標準療法,但并發(fā)癥較多。鼻咽癌引入化療可提高總生存率,但化療藥也存在靶向性低、副作用大的問題。基因治療是治療腫瘤的另一種有效策略,但基因的如何傳遞至靶細胞也是一個重要挑戰(zhàn)。利用納米技術將藥物與基因載于納米粒子內部,在體內靶向進入腫瘤細胞后再將基因與藥物釋放可以有效解決上述問題。本課題組前期研究表明,葉酸受體在鼻咽癌細胞內高表達,并在此基因上合成了葉酸靶向載順鉑磁性納米粒子,可靶向殺傷鼻咽癌細胞。但該磁性納米粒子存在攝取效率低的問題。本研究在前期研究的基礎上制備了兩種葉酸靶向磁性納米載體,以期解決上述問題。制備陽離子聚合物mPEG-PLL-FA,并通過靜電相互作用包裹帶負電的載順鉑的磁性納米粒子ASA-CDDP-MNP,并吸附含有抑癌基因TFPI2質粒,合成一種葉酸靶向載順鉑和TFPI2基因的多功能靶向磁性納米共傳遞系統(tǒng)mPEG-PLL-FA-TFPI2-ASA-MNPs-CDDP。利用核磁氫譜、動態(tài)光衍射、低溫透射電鏡、磁強計檢測磁性納米共傳遞系統(tǒng)的結構及理化特性;血細胞凝集實驗、MTT法、瓊脂糖凝膠電泳分別檢測其生物相容性及對DNA的結合和保護能力;普魯氏藍染色、熒光顯微鏡、Western blot分別檢測磁性納米共傳遞系統(tǒng)的靶向性及基因轉染效率;MTT、劃痕實驗、流式細胞術、平板克隆形成實驗檢測磁性納米共傳遞系統(tǒng)對鼻咽癌細胞HNE-1的靶向抑制作用;MRIT2加權成像檢測磁性納米共傳遞系統(tǒng)在細胞內的成像效果。結果顯示,磁性納米共傳遞系統(tǒng)具有良好的生物相容性、優(yōu)良的靶向性、對鼻咽癌細胞HNE-1有較強的抑制作用和成像效果。但該體系存在轉染效率低的問題。為了克服這一問題,我們用葉酸靶向修飾的季銨陽離子化羥乙基纖維素包裹磁性納米粒子并吸附質粒DNA,形成復合物catHEC-FA@SPIO/pDNA。通過核磁共振氫譜、紅外光譜、紫外光譜、熱失重、X射線衍射、磁化曲線、透射電鏡等手段對產(chǎn)物進行表征;MTT法、瓊脂糖凝膠電泳分別檢測其生物相容性及對DNA的結合和保護能力;普魯氏藍染色、熒光顯微鏡、Western blot分別檢測磁性納米粒靶向性及基因轉染效率;MTT、流式細胞術、檢測磁性納米粒對鼻咽癌細胞HNE-1的靶向抑制作用;MRI T2加權成像檢測磁性納米共傳遞系統(tǒng)在細胞內的成像效果。結果顯示,catHEC-FA@SPIO/pDNA具有良好的生物相容性、優(yōu)良的靶向性、較高的基因轉染效率,對鼻咽癌細胞HNE-1有較強的抑制作用和成像效果。葉酸靶向修飾的季銨陽離子化羥乙基纖維素包裹磁性納米粒子復合物catHEC-FA@SPIO可實現(xiàn)基因傳遞與磁共振成像雙功能化。
[Abstract]:Nasopharyngeal carcinoma (Nasopharyngeal carcinoma NPC) is a common malignant tumor of the southern region of China. Radiotherapy is the standard treatment for nasopharyngeal carcinoma in various stages, but more complications. The introduction of nasopharyngeal carcinoma chemotherapy can improve the total survival rate, but also has targeted chemotherapy, and severe side effects. Gene therapy is another effective the strategy for the treatment of tumors, but how to transfer the gene to target cells is an important challenge. Using nanotechnology to drug and gene contained in the nanoparticles inside, the in vivo targeting into tumor cells after gene and drug release can effectively solve the above problems. Ourprevious studies showed that high expression of folate receptor in nasopharyngeal carcinoma in the cell, and this gene was synthesized with cisplatin loaded magnetic nanoparticles to target folic acid, can be targeted killing of nasopharyngeal carcinoma cells. But the magnetic nanoparticles are the problem of low efficiency of uptake This study. On the basis of the previous research has prepared two kinds of folate targeting vectors of magnetic nanoparticles, in order to solve the above problems. The preparation of cationic polymer mPEG-PLL-FA, and through the electrostatic interaction of cisplatin loaded magnetic nanoparticles coated with negative ASA-CDDP-MNP, and adsorption of tumor suppressor gene TFPI2 containing plasmid, multifunctional targeted drug cisplatin the gene expression of TFPI2 and synthesis of a folate targeted delivery system consists of mPEG-PLL-FA-TFPI2-ASA-MNPs-CDDP. magnetic nanoparticles by 1H NMR, dynamic light diffraction, cryo TEM, magnetometer detection magnetic nano delivery system total structure and physicochemical properties; blood cell agglutination test, MTT assay, agarose gel electrophoresis were used to detect the compatibility and the combination of DNA and the protection ability of the biological; Prussian blue staining, fluorescence microscope, Western blot was used to detect the total magnetic nano delivery system and the efficiency of gene transfection to target ; MTT, scratch test, flow cytometry, colony formation assay total magnetic nano delivery system on nasopharyngeal carcinoma HNE-1 cell targeting inhibition; MRIT2 weighted imaging detection system imaging effect of magnetic nano co transmission in cells. The results showed that the total magnetic nano delivery system has good biocompatibility and targeting excellent, inhibit and imaging strong effect on nasopharyngeal carcinoma cells HNE-1. But there is the problem of low transfection efficiency of the system. In order to overcome this problem, we use the folate modified quaternary ammonium cationic hydroxyethyl cellulose coated magnetic nanoparticles and adsorption of plasmid DNA, catHEC-FA@SPIO/pDNA. complexes formed by hydrogen nuclear magnetic resonance spectrum, infrared spectroscopy, UV spectroscopy, thermogravimetric analysis, X ray diffraction, magnetization curve, the structure of product was characterized by transmission electron microscope; MTT assay, agarose gel electrophoresis respectively. To test its biocompatibility and the combination of DNA and protection capacity; the Prussian blue staining, fluorescence microscope, Western blot was used to detect the magnetic nanoparticles targeting and gene transfection efficiency; MTT, flow cytometry, detection of magnetic nanoparticles on nasopharyngeal carcinoma HNE-1 cell targeting inhibition; MRI T2 weighted imaging detection of magnetic nanoparticle the effect of system transfer imaging in cells. The results show that catHEC-FA@SPIO/pDNA has good biocompatibility, excellent targeting, higher gene transfection efficiency, inhibition and stronger effect on the imaging of nasopharyngeal carcinoma cells HNE-1. Folate modified quaternary ammonium cationic hydroxyethyl cellulose coated magnetic nanoparticle composites can achieve catHEC-FA@SPIO gene transfer and dual functional magnetic resonance imaging.

【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R943;R96

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本文編號：1420962