世界上的植物大多都是開(kāi)花植物,花序發(fā)育對(duì)作物產(chǎn)量起著重要影響,并受很多基因控制。其中,水稻TAW1是能促進(jìn)植株花序發(fā)育、形成更多花和種子的高產(chǎn)基因,它是ALOG基因家族成員之一,該家族在單雙子葉植物中均有分布。已發(fā)現(xiàn)水稻TAW1在小桐子中的同源基因能夠促進(jìn)植物花序的發(fā)育。在此基礎(chǔ)上,本工作分析了與小桐子同屬大戟科的蓖麻中TAW1同源基因（RcTAW1）的作用并進(jìn)一步探究添加融合接頭對(duì)它的影響,取得的結(jié)果如下:（1）重組載體的構(gòu)建以蓖麻基因組DNA為模板,利用特異性引物擴(kuò)增得RcTAW1基因,然后將它克隆到pBI121背景載體中,構(gòu)建植物表達(dá)載體pBI（RcTAW1）;再通過(guò)基因融合策略將自聚性Et1接頭片段插入到重組載體pBI（RcTAW1）中,構(gòu)建植物表達(dá)載體pBI（Et1-RcTAW1）;最后通過(guò)測(cè)序驗(yàn)證。生物信息學(xué)分析表明RcTAW1屬于ALOG家族成員。（2）轉(zhuǎn)基因植株的特性分析通過(guò)農(nóng)桿菌葉盤(pán)轉(zhuǎn)化法將所構(gòu)建的兩個(gè)植物表達(dá)載體轉(zhuǎn)入煙草中,分別獲得其陽(yáng)性轉(zhuǎn)基因煙草植株。對(duì)其T₀代轉(zhuǎn)基因植株初步分析可發(fā)現(xiàn)花苞數(shù)確實(shí)高于野生型植株。進(jìn)一步對(duì)其T₁

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖2.1 DNA和蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)

引物配制使用的終濃度為25pmol/μL。首先將裝有需要溶解引物的離心管于4000rpm的轉(zhuǎn)速情況下低速離心1min,這樣可以使粘附在離心管管蓋或管壁上的相關(guān)物質(zhì)或者粉末沉降回管底,再加入適量分子水使其終濃度為25pmol/μL,一般情況下所加水量為管上濃度值乘以80即可。....

圖3.1蓖麻基因組DNA的提取檢測(cè)

首先要對(duì)蓖麻植株的葉片進(jìn)行取樣,準(zhǔn)確稱(chēng)取0.2g左右的蓖麻葉片于備用的1.5mL離心管中,并迅速用液氮速凍起來(lái)。以用于下一步實(shí)驗(yàn)或-80℃保存?zhèn)溆�。根�?jù)2.2.3.1的方法對(duì)蓖麻樣品進(jìn)行基因組DNA的提取,然后取1μl的DNA提取產(chǎn)物電泳檢測(cè),能看到較為清晰的基因組條帶(圖3....

圖3.2 RcTAW1基因的克隆

首先通過(guò)序列比對(duì)找到水稻TAW1在蓖麻中的同源基因RcTAW1,發(fā)現(xiàn)它與水稻和小桐子TAW1的基因結(jié)構(gòu)相似,不含內(nèi)含子。根據(jù)其基因組序列設(shè)計(jì)特異性引物,以新鮮蓖麻葉片所提取的基因組總DNA為模板,采用兩輪PCR進(jìn)行擴(kuò)增。首先利用基因編碼區(qū)外圍引物RcTAW1-uFw、RcTAW....

圖3.3Rc TAW1片段和質(zhì)粒p BI(AIT:T18.2)的酶切檢測(cè)

載體pBI(AIT:T18.2)由本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建。用質(zhì)粒小提試劑盒提取質(zhì)粒pBI(AIT:T18.2)后,并取1μL進(jìn)行電泳檢測(cè)(圖3.3,泳道2),濃度約為40ng/μL。用SacI和XbaI進(jìn)行雙酶切,并對(duì)其酶切產(chǎn)物直接進(jìn)行膠純化,取1μL純化產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測(cè),回收產(chǎn)物的....

本文編號(hào)：4056213