發(fā)布時(shí)間：2020-12-02 10:52

　　目的:外泌體是細(xì)胞分泌的納米級(jí)細(xì)胞外囊泡,是細(xì)胞間遺傳物質(zhì)傳遞的新載體,其在腫瘤標(biāo)志物、癌癥治療、以及組織再生等多種病理和生理過程中起到了關(guān)鍵作用。脫落乳牙牙髓干細(xì)胞（Stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED）是一種具有高增殖、多潛能分化能力且容易獲得的干細(xì)胞,其來源的細(xì)胞外囊泡如外泌體研究較少。因此,本研究利用人脫落乳牙牙髓干細(xì)胞來源的外泌體（SHED-Exos）探究其在牙周炎小鼠體內(nèi)的成骨效果和調(diào)節(jié)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）的體外成骨分化能力,為脫落乳牙牙髓干細(xì)胞來源的外泌體促進(jìn)骨再生提供研究參考。方法:1.外泌體收集:SHED培養(yǎng)至第4-7代,收集細(xì)胞培養(yǎng)液,采用30%蔗糖墊超速離心法提取SHED-Exos,使用透射電子顯微鏡（Transmission electron microscope,TEM）觀察SHED-Exos的形態(tài)特征,利用蛋白質(zhì)印跡法（Western blot）對(duì)表面標(biāo)記物CD63進(jìn)行鑒定;2.BMSCs培養(yǎng)及生物學(xué)特性檢測(cè)（... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

顯微鏡觀察SHED形態(tài)特征（物鏡20×，標(biāo)尺：50μm）

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文72結(jié)果2.1SHED形態(tài)學(xué)特征培養(yǎng)SHEDP4-P7，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞在培養(yǎng)皿底部貼壁生長(zhǎng)，增長(zhǎng)速度穩(wěn)定，并保持大小均勻的梭形或紡錘狀形態(tài)（圖1）。圖1顯微鏡觀察SHED形態(tài)特征（物鏡20×，標(biāo)尺：50μm）2.2SHED-ExosTEM結(jié)果TEM檢測(cè)顯示提取的SHED-Exos是直徑范圍小于100nm的球性膜包裹結(jié)構(gòu)（圖2），符合外泌體直徑范圍為30-150nm囊泡的形態(tài)特征[8]。圖2透射電子顯微鏡觀察SHED-Exos形態(tài)（標(biāo)尺：100nm）

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文82.3SHED-ExosWesternblot結(jié)果CD63屬于四次跨膜蛋白成員，產(chǎn)生于細(xì)胞中，定位于膜結(jié)構(gòu)附近，參與外泌體囊泡的形成和分泌過程[9]。GM130是高爾基體基質(zhì)蛋白，參與細(xì)胞周期、細(xì)胞極化和細(xì)胞定向遷移等過程[10]。Westernblot結(jié)果顯示SHED-ExosCD63表達(dá)呈陽性，而GM130和Gapdh表達(dá)均呈陰性（圖3）。圖3Westernblot檢測(cè)SHED、SHED-Exos和SHED-CM中GM130、CD63蛋白表達(dá)水平

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]樹突狀細(xì)胞外泌體誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化[J]. 王姿,丁麗,鄭曉麗,王恒湘,閆洪敏.  中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志. 2014(03)



本文編號(hào)：2895191