肌抑素是肌肉增生的負(fù)調(diào)控因子,為改良家畜產(chǎn)肉性狀的重要候選基因。本研究設(shè)計(jì)了Cas9/sgRNA表達(dá)載體與供體DNA,通過電轉(zhuǎn)染方法將其導(dǎo)入豬PK15細(xì)胞,經(jīng)G418抗性篩選和熒光蛋白標(biāo)記甄別,篩選到帶陽性標(biāo)記的細(xì)胞克隆。通過跨界PCR、長(zhǎng)距離PCR、Western印跡、Southern印跡及PCR產(chǎn)物測(cè)序,證明了豬肌抑素的第3外顯子序列特異性同源重組事件的發(fā)生。在豬肌抑素的第3外顯子區(qū)域找到了1個(gè)有效的CRISPR/Cas9打靶位點(diǎn),帶陽性標(biāo)記的細(xì)胞克隆經(jīng)過多次篩選分離,獲得了肌抑素單等位基因失活的穩(wěn)定細(xì)胞系,為深入研究肌抑素的功能提供了重要的實(shí)驗(yàn)材料。

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 Cas9/sgRNA表達(dá)載體的靶位點(diǎn)設(shè)計(jì)和載體的構(gòu)建
    1.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染和陽性克隆細(xì)胞篩選
    1.4 跨界PCR和長(zhǎng)距離PCR引物設(shè)計(jì)
    1.5 Southern印跡
    1.6 Western印跡
2 結(jié)果
    2.1 合成載體測(cè)序及酶切驗(yàn)證
    2.2 中靶細(xì)胞分離
    2.3 PCR及產(chǎn)物測(cè)序
    2.4 Southern印跡和Western印跡
3 討論



本文編號(hào)：4004179