發(fā)布時間：2024-06-30 08:05

　　目的羊口瘡(Orf)是由羊口瘡病毒引起綿羊和山羊的一種接觸性人畜共患的傳染病,該病在世界范圍內(nèi)廣泛存在,嚴(yán)重地危害了養(yǎng)羊業(yè)的發(fā)展和人類的健康。本研究擬對上海崇明地區(qū)羊口瘡病毒進(jìn)行分離鑒定,對分離毒株的重要基因進(jìn)行序列分析,以期確定該地區(qū)羊口瘡流行株的特征;以其為目的基因構(gòu)建羊口瘡重組腺病毒,對其進(jìn)行免疫學(xué)評價,為羊口瘡核酸疫苗的研制奠定理論基礎(chǔ)。方法采集上海崇明地區(qū)疑似羊口瘡病毒感染的羔羊唇部結(jié)痂組織,應(yīng)用PCR、MDBK細(xì)胞分離培養(yǎng)、電子顯微鏡觀察、間接免疫熒光等技術(shù)進(jìn)行病毒的分離鑒定,并對兩株上海分離毒株保護(hù)性抗原基因F1L、B2L基因進(jìn)行克隆與序列分析、構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹。應(yīng)用PCR擴(kuò)增ORFV-F416毒株的F1L、B2L目的基因,構(gòu)建重組腺病毒穿梭質(zhì)粒,穿梭質(zhì)粒與骨架質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK-293細(xì)胞,包裝出ORFV重組腺病毒。將重組腺病毒感染MDBK細(xì)胞,以Karber法測定病毒效價,采用PCR、IFA和Western-blotting對重組腺病毒進(jìn)行表達(dá)檢測,同時免疫接種小鼠,通過免疫指標(biāo)的檢測和攻毒保護(hù)試驗進(jìn)行免疫效果評價。結(jié)果1、成功分離到兩株ORFV,分別命名為ORFV-F4...

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2-1結(jié)痂中ORFVF1L和B2L基因的PCR擴(kuò)增結(jié)果

結(jié)痂中ORFVF1L和B2L基因的PCRmplificationresultsofF1LandB2LofORrker；1~2：F1L基因；3：FIL陰性對照；4~5：B2L基獲得的2株病毒，分別命名為OR有明顯的CPE，細(xì)胞出現(xiàn)融合、腫”....

圖2-2ORFV在MDBK細(xì)胞上引起的病變效Fig.2-2CytopathyofORFVonMDBKcellsABC

Fig.2-1PCRamplificationresultsofF1LandB2LofORFVinthescabs注：M：DL2000Marker；1~2：F1L基因；3：FIL陰性對照；4~5：B2L基因；6：B2L陰性對照2.2ORFV....

圖2-3感染后MDBK細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)

圖2-3感染后MDBK細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)Fig.2-3UltrastructureofMDBKcellsafterinfection注：A：ORFV-F416株；B：ORFV-F429株4IFA檢測ORFV在感染細(xì)胞內(nèi)的分布情況

圖2-4間接免疫熒光檢測ORFV在被感染MDBK細(xì)胞中的分布

Fig.2-3UltrastructureofMDBKcellsafterinfection注：A：ORFV-F416株；B：ORFV-F429株.4IFA檢測ORFV在感染細(xì)胞內(nèi)的分布情況待感染ORFV的MDBK細(xì)胞CPE穩(wěn)定后，通過間接免....

本文編號：3998571