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EIF3D基因?qū)τ谀懝馨┘?xì)胞增殖遷移能力影響

發(fā)布時間:2020-12-04 23:21
  目的:膽管癌是一種起源于膽管上皮細(xì)胞的,發(fā)病率位于原發(fā)性肝癌第二位的惡性腫瘤,由于其缺乏早期診斷指標(biāo)及易早期侵襲的特點(diǎn),導(dǎo)致膽管癌死亡率高居不下。eIF3d基因是一種在翻譯起始階段起重要作用的基因,目前已經(jīng)有很多關(guān)于eIF3d基因在腫瘤中的研究,并且它被發(fā)現(xiàn)有不同程度的促癌作用,然而其在膽管癌發(fā)病過程中起到的作用尚未明確。本研究主要通過慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)敲減膽管癌細(xì)胞中eIF3d基因的表達(dá),進(jìn)而研究其對于膽管癌細(xì)胞株增殖,遷移,及細(xì)胞周期,細(xì)胞體內(nèi)成瘤情況的影響。從而探討e IF3d基因能否影響膽管癌細(xì)胞生長及在細(xì)胞生長中發(fā)揮的作用,推測其對膽管癌發(fā)生發(fā)展的影響。方法:1.構(gòu)建慢病毒并轉(zhuǎn)染獲得穩(wěn)定的低表達(dá)eIF3d基因的膽管癌HCC-9810及RBE細(xì)胞系。2.進(jìn)行體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)如,克隆形成實(shí)驗(yàn),MTT實(shí)驗(yàn),Transwell實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證了體外eIF3d基因?qū)τ谀懝馨┘?xì)胞增殖遷移影響,流式細(xì)胞儀檢測敲減eIF3d基因?qū)τ谀懝馨┘?xì)胞周期的影響。通過Western-blot(過蛋白印記實(shí)驗(yàn))檢測細(xì)胞轉(zhuǎn)移及周期相關(guān)蛋白表達(dá)改變情況。3.設(shè)計體內(nèi)實(shí)驗(yàn),構(gòu)建裸鼠成瘤模型,探究eIF3d基因在裸鼠體內(nèi)對膽... 

【文章來源】:山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】:42 頁

【學(xué)位級別】:碩士

【部分圖文】:

EIF3D基因?qū)τ谀懝馨┘?xì)胞增殖遷移能力影響


pLKO.1–TRC質(zhì)粒DNA圖譜

慢病毒,綠色熒光蛋白,轉(zhuǎn)染,顯色


圖 2. (A)慢病毒轉(zhuǎn)染 48h 后鏡下觀測到的綠色熒光蛋白顯色情況。(B)Western-bolt 實(shí)驗(yàn)檢測 eIF3d 在 eIF3d 敲減病毒(shRNA-eIF3d)組及轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒慢病毒對照組(Control)分別HCCC-9810 及 RBE 的表達(dá)情況我們通過使用慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù),分別于膽管癌 HCCC-9810 及 RBE 細(xì)胞系中轉(zhuǎn)染 eIF3d 敲減病毒(shRNA-eIF3d)及空質(zhì)粒慢病毒(Control),同時在慢病毒轉(zhuǎn)染后的 48 小時觀察細(xì)胞中 GFP(綠色熒光蛋白)的表達(dá)情況來推測其轉(zhuǎn)染效率(結(jié)果如圖 2 所示),兩株細(xì)胞均達(dá)到很好的轉(zhuǎn)染效率。接著通過 Western-bolt進(jìn)一步驗(yàn)證 eIF3d 敲減病毒(shRNA-eIF3d)的敲減效率,對敲減組細(xì)胞及其對照組進(jìn)行檢測,從而進(jìn)一步對慢病毒轉(zhuǎn)染后的實(shí)際敲減效率進(jìn)行驗(yàn)證,Western-bolt 結(jié)果顯示,與對照組相比,eIF3d 敲減病毒組的蛋白表達(dá)水平明顯降低。通過使用慢病毒轉(zhuǎn)染法獲得了較高的轉(zhuǎn)染效率,并且能夠有效的降低其在細(xì)胞中的表達(dá)量,同時獲得了穩(wěn)定低表達(dá) eIF3d 基因的膽管癌 HCCC-9810 及 RBE 細(xì)胞系。

膽管癌細(xì)胞,基因,促進(jìn)功能,體外增殖


山西醫(yī)科大學(xué)(博)碩士學(xué)位論文2.2 抑制 eIF3d 基因可以顯著抑制膽管細(xì)胞體外增殖能力。由于很多研究都發(fā)現(xiàn)了eIF3d基因在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起促進(jìn)作用,基于這些,我們推測 eIF3d 基因很可能在膽管癌細(xì)胞增殖和運(yùn)動侵襲中起到了一定的調(diào)控促進(jìn)功能。為了驗(yàn)證 eIF3d 對于膽管癌細(xì)胞增殖能力的影響,我們設(shè)計了兩個實(shí)驗(yàn)分別從細(xì)胞群及單個細(xì)胞驗(yàn)證其對于膽管癌細(xì)胞增殖能力的影響


本文編號:2898417

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