發(fā)布時間：2024-07-06 01:33

　　【目的】通過統(tǒng)計(jì)分析MAP4K4在食管鱗癌中的表達(dá)情況與臨床病理特征以及預(yù)后情況之間聯(lián)系,進(jìn)一步用體外實(shí)驗(yàn)揭示MAP4K4表達(dá)改變對食管鱗癌細(xì)胞增殖、凋亡水平以及遷移、侵襲能力的影響及其分子機(jī)制,探討MAP4K4蛋白作為食管鱗癌患者靶向治療潛在位點(diǎn)和預(yù)后判斷的潛在價值�！痉椒ā�(1)基于生物信息學(xué)通過GEO數(shù)據(jù)庫統(tǒng)計(jì)分析食管鱗癌中MAP4K4表達(dá)情況,提取MAP4K4數(shù)據(jù),標(biāo)準(zhǔn)化后統(tǒng)計(jì)分析;收集55對食管鱗癌患者癌與癌旁正常組織,通過免疫組化的方法來檢測組織中MAP4K4的表達(dá)情況,并分析MAP4K4表達(dá)量與患者臨床病理特征及預(yù)后之間聯(lián)系;WesternBlotting法對比檢測正常食管上皮細(xì)胞系Het-1a與食管鱗癌細(xì)胞系TE-1、ECA-109中MAP4K4的表達(dá)差異;(2)在利用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK-293T細(xì)胞以及PEG沉淀法包裝、濃縮慢病毒后,選取MAP4K4表達(dá)較高的食管鱗癌ECA-109細(xì)胞系進(jìn)行慢病毒轉(zhuǎn)染敲低;熒光顯微鏡觀察陽性細(xì)胞率,用流式分選出GFP表達(dá)陽性的細(xì)胞;通過Western Blotting檢測和評估敲低處理前后細(xì)胞中MAP4K4的表達(dá)改變;(3)細(xì)胞計(jì)數(shù)法及克...

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略詞
第一章 緒論
    1.1 食管鱗癌
        1.1.1 食管鱗癌的診斷
        1.1.2 食管鱗癌的治療
    1.2 MAP4K4
        1.2.1 MAP4K4 概述
        1.2.2 MAP4K4 與腫瘤
    1.3 研究目的、實(shí)驗(yàn)方法、實(shí)驗(yàn)方案以及意義
        1.3.1 研究目的
        1.3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.3.3 實(shí)驗(yàn)方案
        1.3.4 研究意義
第二章 MAP4K4 在食管鱗癌組織、細(xì)胞中的表達(dá)情況
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)所需組織、細(xì)胞
        2.1.2 主要試劑和材料
        2.1.3 主要儀器和設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 芯片數(shù)據(jù)的獲取
        2.2.2 免疫組織化學(xué)
        2.2.3 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.4 蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Western Blotting)
        2.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 GEO數(shù)據(jù)庫中MAP4K4 在食管癌與正常食管中的表達(dá)情況
        2.3.2 MAP4K4 在食管鱗癌與癌旁組織中的表達(dá)情況
        2.3.3 MAP4K4 表達(dá)與病理特征間的關(guān)系
        2.3.4 MAP4K4 在食管鱗癌中的表達(dá)與預(yù)后的相關(guān)性
        2.3.5 MAP4K4 在食管鱗癌細(xì)胞系中的表達(dá)
    2.4 討論
第三章 MAP4K4 對食管鱗癌細(xì)胞增殖、遷移及凋亡的影響
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)所需細(xì)胞及質(zhì)粒
        3.1.2 主要實(shí)驗(yàn)材料和試劑
        3.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備
    3.2 實(shí)驗(yàn)主要方法
        3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.2 慢病毒包裝及感染ECA-109 細(xì)胞
        3.2.3 MAP4K4 敲低效果的測定
        3.2.4 臺盼藍(lán)染色法分析細(xì)胞增殖
        3.2.5 克隆形成實(shí)驗(yàn)
        3.2.6 劃痕實(shí)驗(yàn)
        3.2.7 Transwell實(shí)驗(yàn)
        3.2.8 使用血清刺激細(xì)胞激活信號通路
        3.2.9 流式分析檢測細(xì)胞凋亡情況(Annexin V-PI雙染法)
        3.2.10 使用Western Blotting檢測細(xì)胞放療前后凋亡相關(guān)蛋白
        3.2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 MAP4K4 穩(wěn)定敲低細(xì)胞株的構(gòu)建
        3.3.2 穩(wěn)定敲低MAP4K4 的鑒定
        3.3.3 MAP4K4 對細(xì)胞增殖的影響
        3.3.4 MAP4K4 對細(xì)胞遷移侵襲的影響
        3.3.5 MAP4K4 對細(xì)胞凋亡的影響
    3.4 討論
第四章 MAP4K4 激活MAPK通路及NF-κB通路
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)所需細(xì)胞
        4.1.2 主要實(shí)驗(yàn)材料和試劑
        4.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備
    4.2 實(shí)驗(yàn)主要方法
        4.2.1 使用血清刺激激活信號通路
        4.2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 MAP4K4 通過激活MAPK通路促進(jìn)細(xì)胞增殖與遷移
        4.3.2 MAP4K4 通過TAK1 激活NF-κB通路發(fā)揮抗凋亡作用
    4.4 討論
第五章 結(jié)論與展望
    5.1 主要結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文



本文編號：4001857