發(fā)布時(shí)間：2018-02-01 13:33

  本文關(guān)鍵詞： 結(jié)直腸癌 MiR-19a THBS1 VEGF 轉(zhuǎn)移 機(jī)制　出處：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：和絕大多數(shù)惡性實(shí)體腫瘤一樣,血道轉(zhuǎn)移和淋巴管轉(zhuǎn)移是結(jié)直腸癌主要的轉(zhuǎn)移途徑。在適合手術(shù)治療的結(jié)直腸癌患者中,有50%左右已經(jīng)發(fā)生了微血管或微淋巴管的轉(zhuǎn)移,這部分病人多數(shù)都會(huì)很快復(fù)發(fā),5年生存率只有10%左右。因此,癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移擴(kuò)散是結(jié)直腸癌致死的主要原因。本課題檢測(cè)了miR-19a在結(jié)直腸癌組織和結(jié)腸癌細(xì)胞株中的表達(dá)情況,并在結(jié)腸癌細(xì)胞株中驗(yàn)證miR-19a下調(diào)THBS1的基因表達(dá)對(duì)VEGF蛋白水平的影響及其對(duì)細(xì)胞增殖遷移能力的促進(jìn)作用,進(jìn)一步研究結(jié)直腸癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移規(guī)律,揭示其內(nèi)在機(jī)制。方法：本課題共分為四個(gè)部分。第一部分檢測(cè)結(jié)直腸癌組織及結(jié)腸癌細(xì)胞株中miR-19a的表達(dá)情況,包括以下實(shí)驗(yàn)：①miR-19a在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)情況。收集臨床結(jié)、直腸癌標(biāo)本,并根據(jù)是否伴有轉(zhuǎn)移情況分為兩組,即有轉(zhuǎn)移組和無(wú)轉(zhuǎn)移組,用qRT-PCR的方法分別檢測(cè)癌組織中miR-19a的表達(dá)情況。②miR-19a在結(jié)腸癌細(xì)胞株中的表達(dá)情況。選取不同惡性程度的結(jié)腸癌細(xì)胞株LoVo,SW480和HT29,仍然用qRT-PCR方法分別檢測(cè)其miR-19a的表達(dá)情況。第二部分檢測(cè)結(jié)腸癌細(xì)胞株中THBS1和VEGF的表達(dá)情況。包括以下實(shí)驗(yàn)：①qRT-PCR和Western-blot的方法分別檢測(cè)結(jié)腸癌細(xì)胞株中THBS1基因表達(dá)和蛋白表達(dá)的情況。②Western-blot檢測(cè)結(jié)腸癌細(xì)胞株中VEGF的表達(dá)情況。③免疫共沉淀的方法驗(yàn)證結(jié)腸癌細(xì)胞株中THBS1蛋白與VEGF蛋白結(jié)合作用。第三部分驗(yàn)證miR-19a對(duì)LoVo細(xì)胞THBS1表達(dá)的調(diào)控及其對(duì)LoVo細(xì)胞增殖和遷移能力的影響。①構(gòu)建miR-19a的SiRNA質(zhì)粒,并轉(zhuǎn)染LoVo細(xì)胞。②驗(yàn)證miR-19a表達(dá)抑制前后LoVo細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)移能力的變化。第四部分通過雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)和雙熒光素酶突變實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR-19a能夠與THBS1的3’端結(jié)合并抑制其表達(dá)。結(jié)果：①結(jié)直腸癌組織中miR-19a呈高表達(dá),且有轉(zhuǎn)移組的表達(dá)明顯高于無(wú)轉(zhuǎn)移組；結(jié)腸癌細(xì)胞株中miR-19a表達(dá)程度由高到低依次是LoVo、SW480和HT29。②qRT-PCR實(shí)驗(yàn)和Western-blot結(jié)果均顯示結(jié)腸癌細(xì)胞株中THBS1的表達(dá)以HT29最高,SW480次之,LoVo最低,差異顯著；Western-blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)腸癌細(xì)胞株中VEGF的蛋白表達(dá)情況結(jié)果以LoVo最高,HCT119和SW480次之,HT29最低,差異顯著；③結(jié)腸癌細(xì)胞株LOVO、SW480和HT29中THBS1與VEGF的免疫共沉淀均呈陽(yáng)性反應(yīng)。④成功構(gòu)建miR-19a的SiRNA質(zhì)粒,并轉(zhuǎn)染LoVo細(xì)胞。劃痕試驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染SiRNA質(zhì)粒后LoVo細(xì)胞增殖和遷移能力均顯著下降,THBS1的表達(dá)明顯升高；⑤雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)和雙熒光素酶突變實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示miR-19a能夠與THBS1的3’端結(jié)合并抑制其表達(dá),當(dāng)miR-19a表達(dá)被抑制時(shí),THBS1表達(dá)明顯升高。結(jié)論：①無(wú)論是結(jié)直腸癌組織中,還是結(jié)腸癌細(xì)胞株中,miR-19a均呈高表達(dá),說(shuō)明miR-19a與結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。②結(jié)腸癌細(xì)胞株中,miR-19a的表達(dá)程度LoVo最高,SW480次之,HT29最低,這與細(xì)胞株的惡性程度一致,說(shuō)明它與結(jié)直腸癌細(xì)胞的惡性程度密切相關(guān)。③結(jié)腸癌細(xì)胞株中,THBS1的表達(dá)程度與細(xì)胞株的惡性程度相反,與miR-19a的表達(dá)程度亦相反；VEGF的蛋白表達(dá)程度與結(jié)腸癌細(xì)胞株的惡性程度一致,與miR-19a的表達(dá)程度也一致；在結(jié)腸癌細(xì)胞株中,THBS1蛋白和VEGF蛋白的免疫共沉淀反應(yīng)均為陽(yáng)性。這說(shuō)明THBS1和VEGF能在結(jié)腸癌細(xì)胞株中發(fā)生結(jié)合反應(yīng),并且都與結(jié)直腸癌細(xì)胞的惡性程度密切相關(guān)。④報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果顯示miR-19a通過與THBS1的3’端結(jié)合發(fā)揮表達(dá)抑制作用。⑤結(jié)腸癌細(xì)胞中,miR-19a通過下調(diào)THBS1基因表達(dá)使其蛋白生成減少,其與VEGF結(jié)合能力減弱,VEGF的蛋白水平升高,因而促微血管和淋巴管生成的作用增強(qiáng),最終為結(jié)腸癌細(xì)胞通過新生微血管和淋巴管轉(zhuǎn)移創(chuàng)造了便利條件。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.35

【參考文獻(xiàn)】

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5 高翔;張淑蘭;;微小RNA在宮頸癌中的研究進(jìn)展[J];國(guó)際婦產(chǎn)科學(xué)雜志;2010年03期

6 魏運(yùn)榮;盧清顯;盧清君;;MicroRNA與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)通報(bào);2010年02期

7 楊雪;劉青光;楊威;;血小板反應(yīng)蛋白-1(TSP-1)在肝細(xì)胞肝癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)中的研究[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2008年09期

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本文編號(hào)：1481976