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復(fù)合中藥提取液對雄激素源性脫發(fā)影響的研究及應(yīng)用

發(fā)布時間:2020-11-20 03:44
   本論文運用中藥復(fù)方結(jié)合現(xiàn)代雄激素源性脫發(fā)發(fā)生的機制,針對雄激素源性脫發(fā)的多靶點性,對復(fù)合中藥提取液進行體外藥效研究,將此復(fù)合中藥提取液制備成清爽、安全有效的防脫育發(fā)精華液,方便雄激素源性脫發(fā)者堅持使用而取得滿意的效果。本論文以紫外分光光光度法,建立體外抑制5α-還原酶活性的方法。在340 nm處,以反應(yīng)液反應(yīng)10 min吸光度的變化值為指標,根據(jù)公式計算出抑制率。在此實驗中,優(yōu)化了5α-還原酶反應(yīng)條件,在2 mL的反應(yīng)體系中,確定了最佳睪酮20μM、NADPH 40μM、酶提取量300μg。在此基礎(chǔ)上,設(shè)置空白對照組、一系列濃度陽性對照組、實驗組。得復(fù)合中藥提取液的濃度為30 mg/mL時,其抑制率為63.35%,與非那雄胺濃度為0.2 mg/mL時相當(dāng)。實驗結(jié)果表明該復(fù)合中藥提取液能有效抑制5α-還原酶活性。采用試管連續(xù)稀釋法測定防脫復(fù)合中藥提取液對金黃色葡萄球菌等三種菌株的MIC值,以提取液濃度稀釋倍數(shù)倒數(shù)計。實驗結(jié)果得出該復(fù)合中藥提取液對金黃色葡萄球菌、痤瘡丙酸桿菌、糠秕馬拉色菌的MIC范圍分別為提取液濃度的1/8~1/5、1/5~1/4、1/5~1/4,對應(yīng)的藥物濃度為3.75~6.0mg/mL、6.0~7.5mg/mL、6.0~7.5mg/m L,比其他一些研究者利用中藥單體或復(fù)方對這三種菌的體外抑制效果好。在以上實驗結(jié)果的基礎(chǔ)上,將復(fù)合中藥提取液制備成防脫育發(fā)精華液,委托廣東省;瘷z測中心對該防脫育發(fā)精華液的衛(wèi)生指標進行檢測及安全性進行評價,該制劑達到了《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》的要求。在研究防脫育發(fā)精華液促進小鼠皮膚微循環(huán)的實驗中,選取昆明種小鼠40只,雌雄各半,隨機分成4組,分別涂抹高、中、低劑量的防脫育發(fā)精華液作為實驗組,以及中劑量的15%乙醇作為空白對照組,實驗采用紅外測溫儀測量實驗前各組小鼠的皮膚溫度及實驗后不同時間點(5、30、45、60、90 min)的皮膚溫度,實驗結(jié)果以不同時間點的溫度與實驗前的溫度差值表示。研究發(fā)現(xiàn),涂抹防脫育發(fā)精華液5 min后,各組小鼠皮膚溫度均低于實驗前溫度,且均有統(tǒng)計學(xué)意義;30 min后,空白對照組小鼠皮膚溫度仍低于實驗前水平,各實驗組小鼠皮膚溫度均高于實驗前水平,且具有統(tǒng)計學(xué)意義;45 min后,空白對照組小鼠皮膚溫度呈上升趨勢,防脫育發(fā)精華液高、中劑量組小鼠皮膚溫度高于30 min時的溫度,低劑量組小鼠皮膚溫度呈下降趨勢,均有統(tǒng)計學(xué)意義;60 min后,防脫育發(fā)精華液高劑量組皮膚溫度依舊呈上升趨勢,中劑量組皮膚溫度呈下降趨勢,均具有統(tǒng)計學(xué)意義;90 min后,空白對照組皮膚溫度依舊低于實驗前水平,防脫育發(fā)精華液高劑量組也呈下降趨勢,但高、中劑量組均高于實驗前水平,低劑量組基本恢復(fù)實驗前水平,且均有統(tǒng)計學(xué)意義。由此實驗結(jié)果可推論:該防脫育發(fā)精華液能提高小鼠皮膚溫度,維持皮膚溫度升高的時間與該精華液的劑量呈正比,表明復(fù)合中藥提取液能提高皮膚溫度,促進皮膚微循環(huán)以C57BL/6J小鼠為實驗?zāi)P?研究防脫育發(fā)精華液對小鼠毛發(fā)生長的影響。實驗分3組,即空白對照組(不含防脫復(fù)合中藥提取物的精華液基方)、陽性對照組(5%的米諾地爾酊)和實驗組(防脫育發(fā)精華液,A組)。采用小鼠毛發(fā)長出前,實驗通過肉眼觀察其背部皮膚變黑的快慢;毛發(fā)長出后,則測量毛發(fā)長度判斷毛發(fā)的生長速度,并在第7天和第18天計數(shù)毛囊數(shù)和第18天通過光鏡觀察毛囊形態(tài)的方案。研究發(fā)現(xiàn):毛發(fā)長出前,肉眼觀察到A組和陽性對照組小鼠背部皮膚最先轉(zhuǎn)黑;毛發(fā)長出后,A組與陽性對照組毛發(fā)有接近的生長速度,但毛發(fā)的最終長度為陽性對照組長,A組和陽性對照組與空白對照組比較皆有明顯的顯著性差異(P0.01);染色后用光鏡觀察統(tǒng)計小鼠毛囊數(shù),發(fā)現(xiàn)第7天和第18天,陽性對照和A組的毛囊數(shù)比空白組多(P0.01);第18天,光鏡觀察顯示,與空白對照組比較,陽性對照組和A組毛囊更為密集,完全被毛乳頭包圍,毛球內(nèi)有很多的黑色素,表明毛囊仍處于生長期。實驗結(jié)果表明該防脫育發(fā)精華液能加快小鼠毛發(fā)的生長速度和延長生產(chǎn)期及增加毛囊個數(shù),促進毛發(fā)的生長,進一步表明復(fù)合中藥提取液能加快小鼠毛發(fā)的生長速度和延長生產(chǎn)期及增加毛囊個數(shù),促進毛發(fā)的生長。在人體功效性試驗中,選取符合試驗要求的30名志愿者,每天在頭皮指定的部位涂抹防脫育發(fā)精華液,通過檢測皮脂的含量,計數(shù)脫發(fā)的數(shù)量,在單位面積內(nèi),計數(shù)毛囊個數(shù),計算毛發(fā)生長速度和脫發(fā)面積。84天后,志愿者各試驗指標都有所改善,表現(xiàn)為皮脂含量分泌下降,脫發(fā)數(shù)量、脫發(fā)面積有所減少,毛囊個數(shù)增多等等。實驗結(jié)果說明該防脫育發(fā)精華液能有效改善雄激素源性脫發(fā)者的脫發(fā)癥狀。綜上所述,本論文研究的復(fù)合中藥提取液能同時作用于抑制5α-還原酶活性,抑制引發(fā)頭皮炎癥的微生物生長,促進皮膚微循環(huán),將其制備成的防脫育發(fā)精華液能有效改善雄激素源性脫發(fā)者的脫發(fā)癥狀。
【學(xué)位單位】:廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位年份】:2017
【中圖分類】:R285.5
【部分圖文】:

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廣東藥科大學(xué)碩士研究生畢業(yè)論文第一章 緒論性脫發(fā)的研究進展脫發(fā)(androgenic alopecia,AGA),又稱男性型脫發(fā)脂溢性脫發(fā)(sebrrheic alopecia,SA),是常見的一種右的男性,但隨著現(xiàn)代生活節(jié)奏的加快,脫發(fā)者越性的過程,其特征是前額兩側(cè)頭發(fā)慢慢變纖細而稀疏,“高額”,但枕及兩顳頭發(fā)仍正常。根據(jù) Norwood-Ham重將脫發(fā)分為 7 級,其中,1~3 級屬于輕度脫發(fā),4~于重度脫發(fā)[1]-[4](圖 1.1)。

標準曲線,標準曲線,睪酮,最適濃度


圖 2.1 蛋白質(zhì)的標準曲線上是蛋白質(zhì)的標準曲線,測得大鼠肝臟粗微粒體提取液蛋白質(zhì)的含量為 4.86 mg/mL,5α-還原酶提取物的含量以總蛋白質(zhì)含量計。4 5α-還原酶反應(yīng)條件的優(yōu)化) 睪酮濃度對酶活性的影響先確定底物睪酮的最適濃度。在 2 mL 的反應(yīng)體系中,固定酶溶液濃度 4.85 的前提下,取酶量 100 μg 和 NADPH30 μM,設(shè)置 T 一系列梯度:0 μM、50 μM、20 μM、40 μM、80 μM,加反應(yīng)液定容至 2 mL,37℃孵育,在 340定 10 min 內(nèi)吸光度變化值(△A:即第 0 min 的吸光度值減去第 10 min 的吸),見圖 2.2。) NADPH 濃度對酶活性的影響定 NADPH的最適濃度,在 2 mL 的反應(yīng)體系中,取(1)中最適的睪酮濃度,固取量,設(shè)置 NADPH 一系列梯度:0 μM、10 μM、20 μM、30 μM、40 μM、

睪酮,酶活性,濃度


睪酮濃度對酶活性的影響
【參考文獻】

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本文編號:2890895

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