目的探究長(zhǎng)期服用寒痹停片及制馬錢子粉是否會(huì)引起馬錢子堿與士的寧在正常大鼠及佐劑關(guān)節(jié)炎大鼠體內(nèi)的蓄積,及寒痹停片復(fù)方配伍對(duì)馬錢子粉中的馬錢子堿與士的寧的藥動(dòng)學(xué)是否存在影響,同時(shí)測(cè)定大鼠肝臟CYP450酶的含量,以初步探討寒痹停片復(fù)方制劑及制馬錢子粉對(duì)大鼠代謝的影響,為寒痹停片的臨床安全、合理用藥提供科學(xué)依據(jù)。方法1.寒痹停片中馬錢子堿與士的寧在健康大鼠體內(nèi)多次給藥的藥動(dòng)學(xué)研究。Wistar大鼠24只,雌雄各半,分為空白對(duì)照組、寒痹停片組和制馬錢子粉組,每組8只,給藥組根據(jù)臨床上寒痹停片成人單次口服劑量及人與動(dòng)物間的等效劑量換算,分別按寒痹停片0.1386g·kg~(-1)、制馬錢子粉6.93mg·kg~(-1)(按士的寧計(jì)為1.1mg·kg~(-1))的劑量灌胃給藥,每天給藥3次,連續(xù)灌胃7天。自第3天開(kāi)始,每天于第二次灌胃給藥后300min眼眶靜脈采血,第7天早上灌胃給藥后5、10、20、30、45、60、90、120、180、300、420、540、720min眼眶靜脈取血,采用UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS法測(cè)定大鼠各時(shí)間點(diǎn)血漿中馬錢子堿與士的寧的血藥濃度,DAS3.0軟件計(jì)算馬錢子堿與士的寧的藥動(dòng)學(xué)參數(shù),利用SPSS22.0軟件對(duì)所得的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。2.寒痹停片中馬錢子堿與士的寧在佐劑大鼠體內(nèi)多次給藥的藥動(dòng)學(xué)研究。(1)造模隨機(jī)取Wistar雄性大鼠50只,在其右后足跖部注射弗氏完全佐劑0.1mL致炎,于致炎前及致炎后第1、3、5、7、9、11、13、15天測(cè)定大鼠左右足跖部體積,觀察大鼠關(guān)節(jié)紅腫程度及毛色變化,計(jì)算足跖腫脹率、關(guān)節(jié)炎指數(shù),初步判斷造模是否成功。于第15天經(jīng)眼眶靜脈取血后,離心,取血清,經(jīng)ELISA法測(cè)定血清中IL-1β、TNF-α含量,再次驗(yàn)證造模是否成功。(2)分組將造模成功的大鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組、寒痹停片臨床劑量組、寒痹停片高劑量組、制馬錢子粉臨床劑量組、制馬錢子粉高劑量組,每組8只。(3)給藥與取血臨床劑量組按寒痹停片0.1386g·kg~(-1)、制馬錢子粉6.93mg·kg~(-1)(按士的寧計(jì)為1.1mg·kg~(-1))的劑量灌胃給藥,高劑量組按寒痹停片1.0452g·kg~(-1)、制馬錢子粉0.1534g·kg~(-1)(按士的寧計(jì)為12mg·kg~(-1))的劑量灌胃給藥,每天給藥3次,連續(xù)灌胃7天。自第3天開(kāi)始,每天于第二次灌胃給藥后300min眼眶靜脈采血,第7天早上灌胃給藥后5、10、20、30、45、60、90、120、180、300、420、540、720min眼眶靜脈取血。(4)血藥濃度測(cè)定及數(shù)據(jù)處理采用UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS法測(cè)定大鼠各時(shí)間點(diǎn)血漿中馬錢子堿與士的寧的血藥濃度,DAS3.0軟件計(jì)算馬錢子堿與士的寧的藥動(dòng)學(xué)參數(shù),利用SPSS22.0軟件對(duì)所得的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。3.寒痹停片及制馬錢子粉對(duì)大鼠肝臟CYP450酶的影響。取上述1、2部分灌胃給藥后第8天的大鼠,稱重后腹腔注射10%水合氯醛麻醉,剖開(kāi)腹腔,迅速取出肝臟,放于冰冷的生理鹽水中沖洗干凈,濾紙吸干水分,稱重,計(jì)算各組大鼠的肝臟指數(shù)。再將肝臟剪碎,用pH7.5的TMS緩沖液制成20%(w/v)的勻漿,再用低溫高速離心機(jī)(10~4×g)離心15min,取上清液加入88mmol·L~(-1)的氯化鈣溶液,使其終濃度為8mmol·L~(-1),稍攪拌混合,放冰浴5min,高速離心機(jī)27000×g離心15min,取沉淀重懸于TMS緩沖液中,用ELISA試劑盒測(cè)定肝微粒體在450nm波長(zhǎng)下的吸光度,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算大鼠肝臟中CYP450酶的濃度。結(jié)果1.寒痹停片中馬錢子堿與士的寧在正常大鼠體內(nèi)多次給藥的藥動(dòng)學(xué)研究。寒痹停片及制馬錢子粉中馬錢子堿與士的寧在大鼠給藥3天后血藥濃度達(dá)到穩(wěn)態(tài)。末次給藥后,寒痹停片中馬錢子堿和士的寧的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)分別為:T_(1/2)為4.56、3.32h,T_(max)為0.43、1.57h,T_(1/2Ka)為1.17、3.05h,Ka為11.54、3.70h~(-1),C_(max)為6.04、38.17ng·L~(-1),AUC_(0→t)為23.17、534.33ng·h·L~(-1),CL/F為25038.89、6226.80L·h~(-1)·kg~(-1);制馬錢子粉中馬錢子堿和士的寧的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)分別為:T_(1/2)為5.87、3.73h,T_(max)為0.66、1.04h,T_(1/2Ka)為4.57、9.88h,Ka為3.31、2.59h~(-1),C_(max)為1.31、22.07ng·L~(-1),AUC_(0→t)為45.43、376.63ng·h·L~(-1),CL/F為61028.54、16162.44L·h~(-1)·kg~(-1)。經(jīng)SPSS統(tǒng)計(jì)軟件分析,與制馬錢子粉相比,寒痹停片中馬錢子堿的清除率顯著降低。2.寒痹停片中馬錢子堿與士的寧在佐劑大鼠體內(nèi)多次給藥的藥動(dòng)學(xué)研究。寒痹停片及制馬錢子粉的臨床劑量和高劑量組,馬錢子堿與士的寧在大鼠給藥3天后血藥濃度均達(dá)到穩(wěn)態(tài)。末次給藥后寒痹停片臨床劑量組中馬錢子堿與士的寧的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)為:T_(1/2)為2.23、3.35h,T_(max)為0.23、1.25h,T_(1/2Ka)為1.73、2.30h,Ka為0.44、0.37h~(-1),C_(max)為44.64、324.92ng·L~(-1),AUC_(0→t)為490.6、6336.5ng·h·L~(-1),CL/F為113456、13026L·h~(-1)·kg~(-1);制馬錢子粉臨床劑量組中馬錢子堿與士的寧的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)為:T_(1/2)為2.34、2.64h,T_(max)為0.56、0.56h,T_(1/2Ka)為1.50、1.89h,Ka為0.60、0.46h~(-1),C_(max)為17.38、165.89ng·L~(-1),AUC_(0→t)為190.1、2035.1ng·h·L~(-1),CL/F為313853、104873L·h~(-1)·kg~(-1);寒痹停片高劑量組中馬錢子堿與士的寧的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)為:T_(1/2)為3.09、2.96h,T_(max)為0.95、0.87h,T_(1/2Ka)為1.06、1.22h,Ka為0.86、0.66h~(-1),C_(max)為232.97、626.74ng·L~(-1),AUC_(0→t)為1826.6、4382.5ng·h·L~(-1),CL/F為3786738、2156109L·h~(-1)·kg~(-1);制馬錢子粉高劑量組中馬錢子堿與士的寧的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)為:T_(1/2)為1.14、1.67h,T_(max)為0.37、0.54h,T_(1/2Ka)為0.74、0.91h,Ka為1.13、0.84h~(-1),C_(max)為124.36、532.51ng·L~(-1),AUC_(0→t)為659.9、3437.3ng·h·L~(-1),CL/F為1893384、267919L·h~(-1)·kg~(-1)。經(jīng)SPSS統(tǒng)計(jì)軟件分析,以制馬錢子粉為參照,臨床劑量組中寒痹停片中馬錢子堿的C_(max)極顯著增加;高劑量組中寒痹停片中馬錢子堿的T_(1/2)、T_(max)極顯著延長(zhǎng),AUC_(0→t)顯著增加,士的寧的T_(1/2)顯著延長(zhǎng)。3.在臨床給藥劑量下,佐劑大鼠與健康大鼠相比,寒痹停片和制馬錢子粉中馬錢子堿的T_(1/2)是健康大鼠的0.49、0.40倍,CL/F是4.53、5.14倍,AUC_(0→t)是21.17、4.18倍,Ka是0.04、0.18倍,T_(1/2Ka)是1.48、0.33倍,T_(max)是0.53、0.85倍,C_(max)是7.39、13.27倍;士的寧的T_(1/2)是健康大鼠的1.01、0.71倍,CL/F是2.09、6.49倍,AUC_(0→t)是11.86、5.40倍,Ka是0.1、0.18倍,T_(1/2Ka)是0.75、0.19倍,T_(max)是0.80、0.54倍,C_(max)是8.51、7.52倍。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析,寒痹停片中馬錢子堿的T_(1/2)、Ka、T_(max)與健康大鼠相比顯著降低,兩種藥物中的馬錢子堿與士的寧的C_(max)與AUC_(0→t)極顯著增加,CL/F顯著加快。4.寒痹停片及制馬錢子粉對(duì)大鼠肝臟CYP450酶的影響。健康大鼠:大鼠灌胃給予寒痹停片與制馬錢子粉后,肝指數(shù)分別為3.67、3.61,空白對(duì)照組為3.35;肝臟CYP450酶含量分別為0.1720、0.1558ng·ml~(-1),空白對(duì)照組為0.1438ng·ml~(-1)。其中,與空白對(duì)照組相比,寒痹停片與制馬錢子粉組肝指數(shù)顯著增加,肝臟CYP450酶含量雖也有所增加,但差異無(wú)顯著性。而寒痹停片組與制馬錢子粉組間肝指數(shù)與肝CYP450酶含量均無(wú)顯著性差異。佐劑性大鼠:臨床劑量下,寒痹停片與制馬錢子粉的肝指數(shù)分別為3.15、3.14,模型對(duì)照組為3.11;肝臟CYP450酶含量分別為0.1533、0.1567,模型對(duì)照組為0.1480。高劑量下,寒痹停片與制馬錢子粉的肝指數(shù)分別為3.40、3.39;肝臟CYP450酶含量分別為0.1679、0.1581。與模型對(duì)照組相比,寒痹停片與制馬錢子粉在兩種劑量下肝指數(shù)均有所增加,但高劑量增加幅度更大,而肝CYP450酶含量在臨床劑量與高劑量下,與模型組相比,均無(wú)顯著性差異。寒痹停片組與制馬錢子粉組之間,肝指數(shù)與CYP450酶含量均無(wú)顯著性差異。結(jié)論1.寒痹停片及制馬錢子粉中馬錢子堿與士的寧在健康大鼠體內(nèi)多次給藥的藥動(dòng)學(xué)過(guò)程符合一房室模型。寒痹停片復(fù)方配伍可使制馬錢子粉中馬錢子堿的清除率顯著降低,說(shuō)明寒痹停片復(fù)方配伍對(duì)制馬錢子粉中馬錢子堿的體內(nèi)消除過(guò)程有影響。給藥3天后,寒痹停片及制馬錢子粉中馬錢子堿與士的寧的血藥濃度均達(dá)穩(wěn)態(tài),并未出現(xiàn)隨著給藥時(shí)間的延長(zhǎng),血藥濃度持續(xù)增加的現(xiàn)象。提示臨床給藥劑量下,長(zhǎng)期給予寒痹停片及制馬錢子粉不會(huì)引起毒性成分在正常大鼠體內(nèi)蓄積導(dǎo)致血藥濃度的持續(xù)疊加升高,引起中毒現(xiàn)象發(fā)生的可能。2.寒痹停片及制馬錢子粉不同給藥劑量下,馬錢子堿與士的寧在佐劑大鼠體內(nèi)多次給藥的藥動(dòng)學(xué)過(guò)程均符合一房室模型。各組中的馬錢子堿與士的寧的血藥濃度在給藥3天后均達(dá)穩(wěn)態(tài),沒(méi)有出現(xiàn)隨著給藥次數(shù)的增加血藥濃度升高,大鼠死亡的現(xiàn)象。提示在非致死劑量下,長(zhǎng)期給予寒痹停片及制馬錢子粉不會(huì)引起毒性成分在佐劑大鼠體內(nèi)蓄積導(dǎo)致血藥濃度的持續(xù)疊加升高,引起中毒現(xiàn)象發(fā)生的可能。寒痹停片與制馬錢子粉相比,在臨床劑量下,馬錢子堿的吸收極顯著增加;高劑量下,馬錢子堿的吸收速度極顯著加快,吸收量顯著增加,馬錢子堿與士的寧的消除速度顯著加快。提示寒痹停片復(fù)方配伍可促進(jìn)制馬錢子粉中馬錢子堿的吸收,劑量越高,配伍因素對(duì)馬錢子堿與士的寧吸收與消除的影響越大。3.在臨床給藥劑量下,佐劑大鼠與健康大鼠相比,C_(max)與AUC_(0→t)均極顯著增加,CL/F顯著加快。提示在病理狀態(tài)下,寒痹停片及制馬錢子粉中的馬錢子堿與士的寧在大鼠體內(nèi)的吸收可極顯著增加,消除速率顯著加快。4.佐劑性關(guān)節(jié)炎模型對(duì)大鼠肝臟有一定的損傷,可使大鼠的肝臟指數(shù)下降,但灌胃給予高劑量的寒痹停片及制馬錢子粉后,大鼠的肝指數(shù)又恢復(fù)正常,提示藥物對(duì)肝臟有一定的保護(hù)作用;在健康狀態(tài)或是病理狀態(tài)下,寒痹停片及制馬錢子粉對(duì)大鼠肝臟CYP450酶的含量均無(wú)顯著性影響,初步判定該藥物對(duì)肝酶活性沒(méi)有明顯的影響。
【學(xué)位單位】：河南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：
馬錢子堿標(biāo)準(zhǔn)曲線
3 為馬錢子堿）圖 1 各血漿中馬錢子堿和士的寧的總離子流圖3.1.2 工作曲線的建立精密吸取“2.1.1”項(xiàng)下一系列的混合對(duì)照品溶液各 20μL，分別加入空白大鼠血漿 100μL ，使混合對(duì)照品濃度分別變?yōu)轳R錢子堿 0.059、0.234、0.938、3.750、7.501、15.002、30.003、60.006ng·mL-1，士的寧 0.122、0.482、1.922、7.688、15.375、30.750、61.504、123.008ng·mL-1的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，再按“2.4”項(xiàng)下血漿樣品處理方法處理，按“2.5”項(xiàng)下方法進(jìn)樣，以待測(cè)物與內(nèi)標(biāo)峰面積比值（y），對(duì)待測(cè)物濃度（x）進(jìn)行線性回歸
馬錢子堿在寒痹停片及制馬錢子粉中的平均血藥濃度-時(shí)間曲線（n=8）
【相似文獻(xiàn)】
相關(guān)期刊論文 前10條
1 畢振宇;武斌;劉陽(yáng);丁自海;楊宇超;歐陽(yáng)鈞;;Wistar大鼠舌部毛細(xì)血管鑄型結(jié)構(gòu)[J];解剖學(xué)雜志;2016年05期
2 宋歌;呂月濤;狄林林;宗文納;陳伯旺;;早期腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)對(duì)重癥肺炎大鼠免疫功能的影響分析[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)前沿雜志(電子版);2017年01期
3 葉敏;陳達(dá)柔;陳宇中;杜少冰;杜展鑫;李玉鳳;唐珮瑜;楊昌山;朱曉琴;;右美托咪定后處理對(duì)大鼠肝缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[J];臨床醫(yī)學(xué)工程;2017年02期
4 王雅樂(lè);李文泉;姚鳳云;;黃連解毒湯對(duì)營(yíng)養(yǎng)性肥胖大鼠的毒性研究[J];光明中醫(yī);2017年10期
5 關(guān)智宇;;三七總皂甙對(duì)骨折大鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子基因擴(kuò)增及蛋白表達(dá)水平影響的研究[J];臨床醫(yī)藥文獻(xiàn)電子雜志;2017年51期
6 王帥;賈琦珍;陳根元;程勇;張玲;馬春暉;;小花棘豆中毒對(duì)大鼠下丘腦—垂體—卵巢軸α-甘露糖苷酶的影響[J];福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2016年01期
7 周挺;夏菁;李增攀;徐麗艷;韓文文;方建江;;法舒地爾對(duì)百草枯致大鼠肺纖維化的干預(yù)作用[J];浙江實(shí)用醫(yī)學(xué);2016年01期
8 王亞?wèn)|;李東朋;郭德偉;宋及時(shí);李紅偉;錢偉強(qiáng);楊波;;富血小板血漿對(duì)創(chuàng)傷性顱腦損傷大鼠神經(jīng)功能的保護(hù)作用[J];吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2016年05期
9 鄭國(guó)祥;于強(qiáng);;白虎湯對(duì)全身炎癥反應(yīng)綜合征大鼠炎癥因子的影響[J];四川中醫(yī);2015年01期
10 符暉;王橋生;方志雄;劉雁;周斌;彭忠田;梁咸章;;辛伐他汀預(yù)處理對(duì)大鼠神經(jīng)源性肺水腫的作用及其機(jī)制[J];中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志;2015年10期
相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條
1 劉兵;體外心臟震波對(duì)急性心肌梗死大鼠心肌新生血管的作用機(jī)制及安全性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2018年
2 吳華博;飲食鐵含量和運(yùn)動(dòng)對(duì)腦內(nèi)金屬離子和氧化還原狀態(tài)的影響[D];江蘇大學(xué);2018年
3 陳丹;高脂飲食致大鼠心肌線粒體動(dòng)力學(xué)、線粒體復(fù)合酶損傷[D];山東大學(xué);2018年
4 關(guān)洪亮;IL-11在大鼠下肢缺血再灌注過(guò)程中對(duì)股動(dòng)脈壁損傷的作用及其機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2018年
5 周亞?wèn)|;Nrf2/ARE信號(hào)通路在急性百草枯中毒大鼠肺損傷中的作用及萊菔硫烷的干預(yù)機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2018年
6 李學(xué)勇;蒙醫(yī)針刺治療法對(duì)腦卒中后抑郁模型大鼠的作用機(jī)制研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2017年
7 仇立波;電針傍刺對(duì)大鼠壓瘡損傷修復(fù)與MAPK/ERK信號(hào)通路影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2016年
8 林逕蒼;大鼠妊娠期缺氧對(duì)子代鼠內(nèi)耳全基因表達(dá)譜和內(nèi)耳發(fā)育影響的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2017年
9 施曉蕓;高血壓加速并加重主動(dòng)脈老化、鈣化的發(fā)生發(fā)展過(guò)程及其可能機(jī)制[D];福建醫(yī)科大學(xué);2016年
10 卞藝斐;馬齒莧對(duì)實(shí)驗(yàn)性腸炎大鼠的保護(hù)作用及其機(jī)制研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2018年
相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條
1 金偉中;出生前尼古丁暴露對(duì)新生大鼠orexin A呼吸調(diào)節(jié)作用的影響[D];復(fù)旦大學(xué);2009年
2 胡靜蕓;灌服飽和甲烷水對(duì)SD大鼠一次性力竭運(yùn)動(dòng)后肝臟炎癥和氧化應(yīng)激的影響[D];上海體育學(xué)院;2018年
3 杜博文;針刺對(duì)慢性不可預(yù)見(jiàn)性溫和刺激抑郁模型大鼠行為學(xué)研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2018年
4 陳歡;慢性心理應(yīng)激對(duì)T2DM大鼠胰島β細(xì)胞的影響及逍遙散的干預(yù)機(jī)制[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2018年
5 覃景春;潰結(jié)靈對(duì)UC大鼠NLRP3炎性體相關(guān)通路的調(diào)控研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2018年
6 宋彩云;基于權(quán)重分析動(dòng)脈粥樣硬化危險(xiǎn)因素的研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2018年
7 郭書(shū)含;錳中毒大鼠腦紋狀體hBMSCs移植DA能神經(jīng)元分化及相關(guān)蛋白的表達(dá)[D];濟(jì)南大學(xué);2018年
8 姜巖;橙皮素對(duì)百草枯中毒大鼠肺組織損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];濟(jì)南大學(xué);2018年
9 劉晶晶;GSK-3β/NF-κB抑制劑對(duì)大鼠糖尿病心肌病發(fā)生發(fā)展相關(guān)信號(hào)通路的影響[D];濟(jì)南大學(xué);2018年
10 王班彤;PKC大鼠模型表型評(píng)估及prrt2調(diào)控神經(jīng)元興奮性的電生理機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2018年
本文編號(hào)：
2889816
